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上海金穗生物科技有限公司

2012 12-26

制備用于抗原上選擇的噬菌體抗體

轉化后,就得到了菌苔形式的抗體文庫??梢灾苽涑筛视蛢Υ嫖锉4嬗谝?0℃。這是一個原始文庫,象征著具有*價值的資源。的抗體文庫也是由這種原始文庫制備而來的。然而,當用大培養板鋪板擴增原始文庫時,會造成部...

2012 12-26

文庫甘油儲存料中制備噬菌體抗體

1.取適當數量(參見上述討論)的甘油文庫儲存料接種到含有250m12×TY/amp/glu的2L培養錐形瓶中。培養基的A600值應小于0.05。從每個培養瓶中取1ul鋪板確定起始接種物的細菌量。2.在...

2012 12-24

在固相抗原上選擇噬菌體抗體

1.用溶于PBS的2m1抗原(10—1000ug/m1)包被免疫管,室溫過夜。碳酸鹽緩沖液也可使用。2.用PBS洗滌試管3次,并用2%MPBS封閉非特異性結合位點,放在旋轉的轉臺上,37℃l小時。3....

2012 12-24

用可溶性*化抗原進行選擇

液相法可以解決直接包被于固相表面的抗原構象可能發生改變的問題。此外,這個方法也使以結合性親和力使基礎的選擇更加簡單,因為展示多個抗體的噬菌體并無選擇優勢。液相法也易于控制抗原的濃度,這也有利于選擇到有...

2012 12-21

利用血清篩選噬菌體文庫交叉抑制實驗

1.將100ul含有2×1010個PEG—純化噬菌體顆粒的TBS,等量分加到多孔板各孔中,4℃孵育12小時。2.用PBST洗滌數次,在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時。3.用封閉液稀釋血清,其...

2012 12-21

利用血清篩選噬菌體文庫PCR擴增的模板

1.用無菌塑料吸嘴挑取一個AmpR噬菌粒菌落(直徑大約lmm)并將其轉入到0.2mlMicroAmp反應管中,內含20u1洗脫緩沖液。在GeneAmp9600PCR儀中,95℃加熱樣本10分鐘(避免用...

2012 12-19

噬菌體展示文庫fUSE5活體篩選特殊步驟

1.為了洗脫細菌,將900ul的K91KanTerrific肉湯菌液加入裂解后的細胞,并于室溫下孵育20分鐘。2.將步驟1所得全部倒入含有9m1四環素濃度為0.2ug/ml的NZY培養基的50m1錐形...

2012 12-19

噬菌體展示文庫活體篩選的通用步驟

1.通過腹腔注射濃度為1.25%(w/v)的阿佛丁來麻醉小鼠,劑量為每克體重注射15ul的阿佛丁。開始時用*注射300ul。用右手抓住一只小鼠尾部的并提起,使其后腿離地。然后用左手抓住鼠的頭和頸的后部...

2012 12-17

構建pⅧ噬菌粒庫:擴增與儲存

A.輔助噬菌體感染和pⅧ誘導產生1.按10:1感染重數加入VSC-M13輔助噬菌體[約1012空斑形成單位(pfu)]到100ml已轉化的細菌中(見實驗方案6.3)。于37℃靜置孵育30分鐘。2.將上...

2012 12-17

連接插入片段與BstⅪ消化的p8V5載體

A.連接反應1.在13m1離心管中混合下列物質:●20/igp8V5載體(經BstⅪ酶切和純化)●1.25ug插入DNA片段(經BstⅪ、BsiHKAI酶切和純化)●200ul10×連接緩沖液●4ul...

2012 12-14

感受態大腸桿菌SS320的制備

1.從新鮮(時間不超過1周)的2YT/tet平板上挑取單個大腸桿菌SS320的克隆,接種到lml2YT/tet培養基中。37℃200r/min孵育6~8小時。轉移培養基到含有50m12YT/tet培養...

2012 12-14

噬菌體展示文庫的再增殖

1,用一系列稀釋液感染大腸桿菌XLl-Blue(OD600=0.5~1.0),并涂布在用于噬菌粒篩選的適當培養基上,以測定噬菌體文庫儲液的感染性滴度(infectivitytitre)。這個滴度取決于...

2012 12-12

科學家發現基因小差異造成高矮有別

據《科學時報》報道姚明為何能長那么高?原因很可能在于基因的不同。英國科學家近日發現了一種對人類身高有決定性作用的基因,在其他條件不變的情況下,這種基因遺傳密碼只要有微小的變化,就可以促進身高增長一厘米...

2012 12-12

咖啡加運動可以有效降低皮膚癌的患病率

據《*》報道咖啡是許多人生活中*的飲品,其主要成分咖啡陰能夠幫助人們時刻保持充沛精力。但是科學家們近日發現,除了這一功效外,喝咖啡加上經常運動可以有效降低皮膚癌的患病率。長時間的紫外線照射會傷害到人體...

2012 12-10

免疫印跡技術概述

免疫印跡從早期用抗體直接“著染”聚丙烯酰胺凝膠內的蛋白(Burridge1976;Showe等1976)發展為使用多樣化復制技術的方法。例如,將分離的多肽轉移至硝酸纖維素膜,化學活化的濾紙條或尼龍膜上...

2012 12-7

曬黑也跟抗癌蛋白質[p53]有著很密切的關系

當皮膚受到紫外光(ultravioletlight;uvlight)照射時,稱為角朊細胞(kerotinocyte)的皮膚細胞會開始分泌黑細胞促素(melanocyte-stimulatinghorm...

2012 12-7

胚胎干細胞首度被證明可以治愈癱瘓老鼠

當你在閱讀這篇報導時,在世界的某個角落可能就正發生不幸的車禍,造成受害者終生癱瘓而無法再行走。或者此時此刻,在某個醫院診療室的神經科醫師,正無力回天地對病人宣判他們可能罹患多發性硬化癥或肌萎縮性脊髓側...

2012 12-5

制備單克隆抗體動物的選擇與免疫

1.動物的選擇純種BALB/C小鼠較溫順,離窩的活動范圍小,體弱,食量及排污較小,一般環境潔凈的實驗室均能飼養成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALB/C小鼠。2.免疫方案免疫方案應根據抗原...

2012 12-5

放射免疫分析及其在檢驗醫學中應用

放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)是以放射性核素為標記物的標記免疫分析法。于1960年由美國學者Yalow和Berson創立,并首先用于糖尿病患者血漿胰島素含量的測定。這是醫學和...

2012 12-1

熱穩定腸毒素(ST)的快速檢測

(1)ELISA檢測STDe.Mai等(1983)以過氧化物酶標記抗體,用抗原競爭間接法檢測培養液中STl。定性檢測時底物用5—氨基水楊酸,定量時用鄰苯二胺。此法與乳鼠試驗的相符率為96.7%,無假陽...

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