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1．為了洗脫細(xì)菌，將900ul的K91KanTerrific肉湯菌液加入裂解后的細(xì)胞，并于室溫下孵育20分鐘。2．將步驟1所得全部倒入含有9m1四環(huán)素濃度為0．2ug/ml的NZY培養(yǎng)基的50m1錐形...
[方法]1．將100ul含有2×1010個(gè)PEG—純化噬菌體顆粒的TBS，等量分加到多孔板各孔中，4℃孵育12小時(shí)。2．用PBST洗滌數(shù)次，在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時(shí)。3．用封閉液稀釋...
[方法]1．用無菌塑料吸嘴挑取一個(gè)AmpR噬菌粒菌落（直徑大約lmm）并將其轉(zhuǎn)入到0．2mlMicroAmp反應(yīng)管中，內(nèi)含20u1洗脫緩沖液。在GeneAmp9600PCR儀中，95℃加熱樣本10分鐘...
天然V區(qū)可以被看作是在經(jīng)歷過或未經(jīng)歷過抗原刺激的淋巴細(xì)胞中所發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。結(jié)果，有些擴(kuò)增的V基因?qū)?huì)是重排的肝系基因，而另外的則含有B細(xì)胞與抗原相遇所誘導(dǎo)產(chǎn)生的突變體。這些基因擴(kuò)增所用引物可以識(shí)別V基因...
從天然V基因中制備噬菌體抗體文庫(kù)時(shí)，有多種不同B細(xì)胞（即V基因）來源可供選擇。一般而言，可在兩種V基因之間做出選擇：一種是未經(jīng)歷體細(xì)胞突變的V基因[天然的且一般是免疫球蛋白M（1gM）]，一種是發(fā)生過...
[器材和試劑]●PCR試劑和設(shè)備●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接頭的載體●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制用于...
[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制以下PCR反應(yīng)混合液。配制成2個(gè)“反應(yīng)管”，1個(gè)含有V。文庫(kù)DNA，另1個(gè)則含有Vl文庫(kù)DNA。反應(yīng)管對(duì)照1對(duì)照2●scFV接頭DNA（100ng/ul）1．0...
[器材和試劑]●用于細(xì)菌培養(yǎng)的無菌96孔圓底微量滴定板，如Nune62162（可自VWR購(gòu)得）●2×TY/amp/glu培養(yǎng)基●含30％甘油的2×TY/amp/glu培養(yǎng)基（2×TY/amp/glu/...
方法]1．按每孔100ul蛋白抗原包被微量滴定板，4℃過夜。PBS中10ug/m1的濃度是包被抗原的標(biāo)準(zhǔn)濃度。但有時(shí)需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液（比如碳酸鹽緩沖液）。2．棄去抗原液并用PBS洗滌...
抗體基因的突變導(dǎo)人可以是隨機(jī)的，也可以在特異性位點(diǎn)上。隨機(jī)導(dǎo)人突變zui為簡(jiǎn)單，而且也不需要推測(cè)哪個(gè)位點(diǎn)是提高親和力的*突變位點(diǎn)。隨機(jī)突變更接近體內(nèi)的體細(xì)胞高突變過程。導(dǎo)人隨機(jī)突變的一種常用方法是鏈改...
[方法]1．設(shè)計(jì)合成含有CDR3隨機(jī)化序列的VLFOR引物。當(dāng)然，此引物必須以擬進(jìn)行親和力成熟的抗體VL基因作為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)計(jì)。本例中，VLCDR3的7個(gè)氨基酸被隨機(jī)化。在每個(gè)隨機(jī)化位點(diǎn)中，保留了大約5...
我們開始先用VLCDR3隨機(jī)化，是因?yàn)樗话惚萔HCDR3短，更重要的原因是可以在同源結(jié)構(gòu)上建模。VLCDR3隨機(jī)化技術(shù)也較VHCDR3簡(jiǎn)單一些，這是因?yàn)樗挥趕cFv基因的3，端。因此，隨機(jī)化過程只...
免疫組織化學(xué)（1HC）或稱免疫細(xì)胞化學(xué)是一種方法學(xué)，根據(jù)特異性抗原—抗體反應(yīng)的原理，檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原或抗體成分。IHC有一個(gè)很長(zhǎng)的發(fā)展歷史，已有半個(gè)世紀(jì)以上，自Coons創(chuàng)建免疫熒光組化技術(shù)以來...
乙醇—超聲波還原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。（2）用0．2m01/LK2C03調(diào)pH至7．2，再加入lml無水乙醇。...
CAS號(hào)：95-14-7中文名稱：1,2,3-苯駢三氮唑其他中文名稱：1,2,3-苯并三唑；連三氮茚；苯并三氮雜茂；苯并三唑；防銹劑T706；防銹劑706；T406；苯三唑脂肪胺鹽；多效油性劑T406...
1）選擇適當(dāng)?shù)腜ipetman：不同型號(hào)的微量移液器，各有其吸取體積范圍，請(qǐng)依取用溶液體積取用適當(dāng)?shù)奈⒘恳埔浩鳌100.5~10P202~20P10020~100P20050~200P1000200...
方法步驟：1）請(qǐng)取六支微量離心管，分別標(biāo)上A~F。2）以正確使用方法，依下表所列體積吸取不同溶液至各管中。單位ABCDEFSolution130082050180188Solution27001801...
儀器用具：37℃及65℃水浴或恒溫槽藥品試劑：質(zhì)體pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（濃?均為10units/μL,Invitrogen）10×Reactio...
儀器用具：微?離心機(jī)；冰浴藥品試劑：MPI（25mMTris-HCl,pH8.0;10mMEDTA,pH8.0;50mMglucose）MPII新鮮配制（0.2NNaOH;1%SDS;使用前以10NN...
由于RNA聚合酶一般由數(shù)個(gè)次單元組合而成，早先要在試管內(nèi)應(yīng)用RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄活性合成RNA并非易事，但這個(gè)問題在SP6,T3及T7等噬菌體的RNA聚合酶陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)以后，情況已*改觀。這主要是因?yàn)檫@類...
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