1．為了洗脫細(xì)菌，將900ul的K91 Kan Terrific肉湯菌液加入裂解后的細(xì)胞，并于室溫下孵育20分鐘。

2．將步驟1所得全部倒入含有9m1四環(huán)素濃度為0．2ug/ml的NZY培養(yǎng)基的50m1錐形瓶中。室溫下孵育30分鐘。

3．為了測定fd噬菌體的產(chǎn)出量，將步驟2所得分別取1ul、10ul及100ul，涂布到四環(huán)素濃度為40ug/ml的LB瓊脂平板中，每種涂布3個?？梢圆捎貌ＡЩ蚪饘俟巫樱驘o菌玻璃珠，來涂布細(xì)菌。將平板置于37℃孵育16小時（過夜）。

4．為了測定每份器官或組織的噬菌體總產(chǎn)出量，將每個平板上的克?。═U）數(shù)目除以涂板的體積（1ul、10ul或100ul），然后再乘以10000ul。這樣計算的原因是：步驟2中稀釋了10倍，而加到沉淀中的是1000ul K91Kan菌液。例如：在腦組織的10ul培養(yǎng)基平板中平均有200TU的噬菌體，那么在每克腦組織中噬菌體總產(chǎn)出量為2．0×105TU。對每份器官和組織中三個平板的計數(shù)取平均值，并對數(shù)據(jù)作圖。

5．為了擴增及純化回收的“噬菌體， 當(dāng)把樣品涂布在平板上以后，在2L的錐形瓶中將步驟2所剩的9．67ml樣品加到含40ug/ml四環(huán)素的200ml的NZY培養(yǎng)基中，于37℃搖瓶培養(yǎng)16小時（過夜）。

6．把過夜培養(yǎng)的菌液倒入300m1的離心管中，在Sorvall@SLA—3000轉(zhuǎn)子中以8000r/min離心15分鐘。通過帶0．2um濾膜的真空抽濾瓶將上清過濾到500ml無菌瓶中。

7，通過向每200ml噬菌體中添加40ml的PEG/NaCl溶液，把上清中的噬菌體沉淀下來，并于4℃孵育4～16小時。

8．將沉淀噬菌體置于有SLA—3000或平衡轉(zhuǎn)子的Sorvall@中， 以8000r/min離心40分鐘。棄去上清，接著將離心管倒置于紙巾上，并將每份噬菌體的水分排盡，只留下白色沉淀。

9．用20m1的1×TBS溶解每份噬菌體沉淀，將其轉(zhuǎn)入一個30ml的Oak Ridge離心管中并搖勻。通過加4ml的PEG/NaCl溶液，再次沉淀噬菌體，并置于冰上1小時。

10．將沉降后的噬菌體置于Sorvall@SS—34或同等的轉(zhuǎn)子中，以10000r/min（11984g）離心10分鐘。棄去上清，接著將離心管倒置于紙巾上，并將每份噬菌體的水分排盡，只留下白色沉淀。

11．用500ul～1m1含0．1％明膠的1XTBS溶解每份噬菌體沉淀，10000r/min（10640g）短暫離心5分鐘，以除去未溶解的物質(zhì)。將上清轉(zhuǎn)入一支新的1．7m1Eppendorf管中，做好標(biāo)記并保存于4℃。典型的滴定范圍為108-109TU/ul。