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上海金穗生物科技有限公司

利用血清篩選噬菌體文庫交叉抑制實(shí)驗(yàn)

時間：2012-12-21閱讀：308
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1．將100ul含有2 ×1010個PEG—純化噬菌體顆粒的TBS，等量分加到多孔板各孔中，4℃孵育12小時。
2．用PBST洗滌數(shù)次，在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時。
3．用封閉液稀釋血清，其中含1×1010個/mlMl3噬菌體顆粒、50ul/ml的XLl—Blue細(xì)菌提取物以及2×1011個顆粒/ml PEG純化抑制子噬菌粒克隆， 室溫預(yù)孵育3小時。
4．除去板中封閉液，將預(yù)孵育的血清混合物加到噬菌體包被孔中，并在室溫下孵育3小時。
5．用PBST充分洗滌。
6．每孔加100ul堿性磷酸酶標(biāo)記二抗，用封閉液按l：5000比例稀釋，并在室溫下孵育2小時。
7，用PBST洗板數(shù)次，用底物緩沖液洗滌一次。
8．每孔加入100ul含lmg/ml p硝基苯磷酸的底物緩沖液，以顯示堿性磷酸酶反應(yīng)。

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