免疫印跡從早期用抗體直接“著染”聚丙烯酰胺凝膠內的蛋白（Burridge 1976；Showe等1976）發展為使用多樣化復制技術的方法。例如，將分離的多肽轉移至硝酸纖維素膜，化學活化的濾紙條或尼龍膜上（Gershoni和Paladel983；Towbin和Gordon1984；Beisiegell986）。在上述基礎上經過多次改進，zui常用和zui簡便的方法是使用電轉移將分離的蛋白印跡在硝酸纖維素膜上（Towbin等1979；Burnet981）。

1．抗原樣品的制備；
幾乎任何蛋白質都可用于免疫印跡。將蛋白質與標準的樣品緩沖液混合，經凝膠電泳分離后再用于免疫印跡。常用的樣品有純化或部分純化的制備液，細胞粗提液或免疫沉淀樣品。
免疫印跡的優勢是可分析不能用其他免疫化學技術進行研究的蛋白質樣品。例如，不能標記的蛋白質或不溶于溫和抽提緩沖液的蛋白質等。免疫印跡還可分析組織、器官或整個微生物等來源的粗制樣品。
zui常用的樣品來源有3個途徑：蛋白質溶液、細胞裂解液和免疫沉淀蛋白，將在下面分別介紹。但是任何來源的蛋白質經適當處理后都可用于免疫印跡。

2．凝膠電泳分離樣品；
3．分離的多肽轉移至膜載體上；
4．印跡膜總蛋白的染色（根據需要）
5．抗原的檢測。

蛋白質溶液，通常是細胞或組織的抽提液，用凝膠電泳的樣品緩沖液來配制，蛋白質經凝膠電泳分離后轉移至可非特異性結合各種蛋白的膜上。將膜直接與凝膠接觸，然后置于電場中使蛋白質從凝膠印跡轉移至膜上。在某些情況下，可將印跡膜染色檢測印跡蛋白的位置，膜上未結合的位點要進行封閉以去除剩余的反應位點。zui后是確定特異性抗原的位置，通常是先使用未標記的一抗，然后使用標記的二抗。

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