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上海金穗生物科技有限公司

制備單克隆抗體動物的選擇與免疫

時間:2012-12-5閱讀:404
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 1.動物的選擇 純種BALB/C小鼠較溫順,離窩的活動范圍小,體弱,食量及排污較小,一般環境潔凈的實驗室均能飼養成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALB/C小鼠。
2.免疫方案 免疫方案應根據抗原的特性不同而定,選擇合適的免疫方案對細胞融合雜交的成功,并獲得高質量的McAb至關重要。一般在融合前兩個月左右根據確立免疫方案開始初次免疫。對抗原的要求是純度越高越好,尤其是對于初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原,可取1.0X107個細胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加*福氏佐劑并經充分乳化。如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原,可將抗原所在的電泳條帶切下,研磨后直接用于動物免疫。
免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同,因動物、抗原形式、免疫途徑不同而異,以獲得價抗體為zui終目的。免疫間隔一般2—3周。一般被免疫動物的血清抗體效價越高,融合后細胞產生價特異抗體的可能性越大,而且單克隆抗體的質量(如抗體的濃度和親和力)也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價和親和力密切相關。末次免疫后3~4d,可分離脾細胞融合。

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