2012 04-18

PCR反應中Taq酶的選擇

隨著分子生物學研究發展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門相當成熟的常規技術，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個關鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿足多方面的實驗需要。那么，...

2012 04-13

Feulgen反應實驗步驟

標本需經固定后方可染色，Carnoy固定液可按無水乙醇：三氯甲烷：冰醋酸為6：3：1比例配制。固定后石蠟切片即可。盡量不用新鮮組織恒冷箱切片，因胞質中存在的縮醛磷脂會出現非特異染色。若必須使用恒冷箱切...

2012 03-26

轉化子DNA的快速鑒定法

快速細胞破碎法實驗步驟1、挑取轉化平板上的單菌接種于含相應抗生素的2mlLB中，37℃振蕩培養至A590值為0.6～0.8。2、取1ml菌液至1.5mlEppendorf管中，9000rpm離心9mi...

2012 03-19

細胞總RNA的提取操作

1.六孔板每孔細胞中加入1mlTrizol，冰上放置5min，槍頭吹打。2.將各孔裂解液吸到1.5mlEP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振搖15s。15－30℃下孵育2-3min，離心（4℃，12...

2012 03-06

熒光染料-CFSE活細胞標記

熒光染料CFSE（CFDA-SE），是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞。其基本原理如下：CFSE能夠輕易穿透細胞膜，在活細胞內與胞內蛋白共價結合，水解后釋放出綠色熒光。在細胞分裂...

2012 02-27

第三代測序技術

如果有人告訴你用顯微鏡實時觀測單分子DNA聚合酶復制DNA，并用它來測序，你一定會認為他異想天開，沒有一點生物的sense。我zui初就是這樣認為的，然而它不僅可以實現，而且已經實現了！這個就是被稱為...

2012 02-20

大腸菌群顯色培養基

大腸菌群顯色培養基ColiformChromogenicMedium用途：用于快速、準確檢測大腸菌群，培養24小時，大腸菌群顯藍綠色腸菌群顯色培養基是青島海博生物公司改良的培養基，用于食品、水、牛奶、...

2012 02-17

磷酸鹽緩沖液(PB)的配制

1.A液(0.2M*水溶液)：NaH2PO4?H2O27.6g，溶于蒸餾水中，稀釋至1000ml。2.B液(0.2M*水溶液)：Na2HPO4?7H2O53.6g(或Na2HPO4?12H2O71.6...

2012 02-17

提高RT-PCR的靈敏度與產物長度

材料和方法1.EppendorfcMasterRTplusPCR系統2.EppendorfPerfectRNAEukaryotic試劑盒3.所有的PCR反應均在EppendorfMastercycle...

2012 02-10

正常小鼠腎間質成纖維細胞的培養技術

實驗材料：1.腎組織：取自8周齡健康雌性小鼠；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L*、200mg/L*，pH7.2；3.0.1%明膠：為生長基質成分，在取材前先用它包被培養...

2012 02-02

PCR實驗技術指南之污染與對策

PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。1、污染原因(1)標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時...

2012 01-31

實驗儀器器皿中英文對照

很全面的實驗儀器器皿中英文對照，可以使用Ctrl+F鍵來查找，或復制到Word中查找使用。adapter接液管aircondenser空氣冷凝管beaker燒杯boilingflask燒瓶boilin...

2011 12-23

基因文庫的構建

一個基因文庫中應包含的克隆數目與該生物的基因組的大小和被克隆DNA片段的長度有關。原核生物的基因組較小，需要的克隆數也較少；真核生物的基因組較大，克隆數需相應增加，才能包含所有的基因。此外，每一載體D...

2011 12-06

DNA電泳常見問題分析

1請問配制聚丙烯酰胺凝膠電泳膠時，促凝的是TEMED還是過硫酸銨？膠聚時間很長如何解決？過硫酸銨提供驅動丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通過催化過硫酸銨形成自由基而加速它倆的聚合。膠...

2011 11-09

RNA提取

1、RNA降解A、新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。B、新鮮組織：某些富含內源核...

2011 11-02

*梯度溶液分離動物細胞核

試劑和器材：1.OptiPrepTM（600g*，ρ=1.32g/ml）；2.OptiPrepTM稀釋劑（OptiPrepTMdiluent，OD）：150mmol/LKCl、30mmol/LMgCl...

2011 10-24

抗體實驗中各種樣品選擇的條件

一、如何選擇合適的一抗請先確定您要檢測的種屬和使用的實驗方法，然后查找相關產品，根據說明書上描述的“適用種屬和實驗方法”來確定合適的抗體。如果說明書中有明確您要檢測的種屬和實驗方法均經過檢測，則您可以...

2011 10-11

MTT實驗開始前準備

1.選擇適當的細胞接種濃度。一般情況下，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由于不同細胞貼壁后面積差異很大，因此，在進行MTT試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞...

2011 09-19

免疫組化實驗方法

一、免疫組化（Immunohistochemistry,IHC/Immunocytochemistry,ICC）原理免疫組化是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學...

2011 09-14

DNA片段純化常會遇到的問題

1、DNA回收率低A、溶膠液用量過少準確計算凝膠的重量，按比例加入溶膠液。B、凝膠塊未*融化加入溶膠液后，置于55℃~60℃進行水浴，如有必要加入更多量的溶膠液。C、電泳緩沖液使用時間過長，不新鮮換用...