隨著分子生物學研究發展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門相當成熟的常規技術，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個關鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿足多方面的實驗需要。那么，如何選擇zui合適的Taq酶？根據用戶經常考慮的指標，如特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度、能否進行復雜模板擴增以及優化條件難易等等，我們在這兒將主要的Taq酶歸歸類，其性質、用途也就一目了然了。

高特異性Taq酶

高度特異性地擴增所需的片段是PCRzui基本的要求，影響PCR特異性的因素很多，包括模板、引物性質及質量、反應條件的控制等等，而高特異性Taq 酶的出現大大減少了摸條件這一繁瑣的實驗過程，也為PCR產物快速有效的純化（PCR產物直接純化）打下了基礎。這類酶zui典型的代表是熱啟動Taq酶。大家都知道，在PCR*個循環變性之前，有一個升溫的過程，引物和模板會有一些非特異性配對，如果這時Taq酶發揮活性，就很容易產生非特異性擴增，由于循環初期模板量非常少，產生的非特異性條帶經過后面的指數擴增，就會嚴重干擾目的片段的擴增，甚至導致特異性條帶不能擴出。而熱啟動Taq酶是必需經過高溫才能激活的酶，因此在初始循環的變性之前它沒有活性，不會產生非特異性擴增，這就大大提高了PCR擴增的特異性。*代熱啟動Taq酶往往直接在Taq 酶上做一些修飾，比如用抗體抑制，蠟封等，如Clontech、Stratagen、Gibcol-LTI的一些產品，由于抗體、蠟等異物的摻入，對實驗造成一定的影響，也給試驗者帶來一些不便。新一代的熱啟動Taq酶是通過內部改造的重組酶，真正實現便利的熱啟動，代表產品如QIAGEN公司的 HotStar系列，無需別的輔助抑制物，也不用擔心抑制不穩定，使用起來方便、。此外，由于幾乎所有的Taq酶產品都帶有相應的反應緩沖液，緩沖液的品質也對保證Taq酶特異性擴增起著不可忽視的作用，一般的緩沖液中調節H鍵作用的鹽只有KCl，QIAGEN公司的緩沖體系通過 KCl、（NH4）SO4鹽離子體系的平衡調節也提高了酶作用的特異性。

此外，熱啟動的Taq酶也是實現一步法RT-PCR的基礎。如QIAGEN公司的OneStep RT-PCR試劑盒，在RT反應較低溫度下，Taq酶沒有活性，逆轉錄酶發揮活性；RT反應結束，高溫滅活逆轉錄酶的同時，激活Taq酶，進行PCR反應。另一家公司Epicentre有一種MasterAmpTM Tth DNA聚合酶，本身就具有逆轉錄酶活性，也可用作RT-PCR。

高保真Taq酶

下游應用為基因篩選、測序、突變檢測，分子診斷等等的用戶，往往對PCR保真性要求很高，保真性的一個通用標準是錯配率，錯配率越低保真性越好。普通Taq酶的錯配率在2-5X10-5堿基/循環數，而高保真Taq酶錯配率可達10-6數量級，大大降低了出錯的可能。其原理主要是因為高保真Taq酶具有3‘到5’核酸外切酶（Proofreading）的活性，擴增途中如果產生了錯配的堿基，它可以將其切掉，從而保證了擴增的準確性。需要提醒用戶的是由于此酶具有核酸外切酶功能，往往擴增效率低一些，有的還容易降解引物，且產物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。目前市面上主要有兩類產品，一類是混合型的高保真酶，將帶有Proofreading活性的酶與普通Taq酶（用于提高擴增效率）混合起來，錯配率在8-9 X10-6堿基/循環數。Clontech、LTI等公司都有此類產品。如果要求更高的保真度，就要選擇單一型的高保真酶，如Stratagene的 Pfu，NEB公司的Vent DNA 聚合酶，錯配率5.7 X10-5堿基/循環數；QIAGEN公司新推出的ProofStart DNA聚合酶，兼特異性與保真性于一體，其聚合酶及Proofreading活性都為熱啟動，可避免引物降解，錯配率達2-4×10-6堿基/循環數，加上優化的反應體系，可在室溫下配置反應液，可進行復雜模板（高GC含量、二級結構）及長片段的擴增，的確是這類酶中的*。

高耐熱性Taq酶

對于有些模板變性溫度較高，需要時間較長的用戶，可能要求高耐熱性Taq酶，這里介紹NEB公司的Vent和Deep Vent DNA聚合酶系列，兩者都是從海底火山口分離出來后克隆的，是普通Taq酶耐熱性的三倍以上，前者在95℃半衰期近7小時，100℃近2小時；后者更甚，分別為23小時和8小時。

超長片段擴增Taq酶

對于作基因組圖譜、測序及分子遺傳學研究的用戶，可能會用到超長片段的擴增，Clontech公司的Advantage Genomic系列混有Tth DNA聚合酶，Proofreading酶和熱啟動抗體，對復雜模板可擴增10kb片段，簡單模板可達40kb。

關于復雜模板的擴增

對于模板結構復雜，如GC含量高（>60%），有二級結構等，普通的Taq酶可能難以延伸下去，加入DMSO等助熔劑可幫助擴增順利進行，但 DMSO有毒，而且用量需要優化。QIAGEN公司的任何一種Taq酶都附有特制的Q-溶液，操作方便、安全，對復雜模板的擴增特別有效。

關于條件的優化

現下很多的生物試劑公司都提供優化的緩沖液，如QIAGEN公司的緩沖體系，對溫度和Mg2+的耐受性很強，隨試劑盒有推薦的操作手冊，大大減少了反應條件的優化，如果結合好的引物設計軟件和高質量的模板引物，一次成功率*。但任何東西都不是的，如果碰到比較特殊的情況，還需要仔細分析，優化調整。

以上就Taq酶的一些基本分類分別進行了介紹，具體選購時要根據實驗需要擇其重點，再參照其他參數，才能選到zui合適的Taq酶。我們會及時將的技術和產品推薦給大家，希望能幫助大家更快更好的達到實驗目的。