免疫方法——免疫途徑
*常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內、淋巴結、腳掌等注射。
*一般采用多點注射方法
-常在足、掌、腋窩淋巴結周圍、背部兩側、頜下、耳后等處的皮內或皮下。
-皮內易引起細胞免疫反應,有利于提高抗體的效價。
(3) 免疫方法——免疫途徑 (續)
*幾點說明:
-大動物一般不用腹腔注射
-顆粒抗原和使用佐劑時不能靜脈注射
g抗原即可獲得較好的免疫效果。m-抗原寶貴可采用淋巴結內微量注射法,只需10~100
-皮內注射較困難,特別是天冷時更難注入。
(3) 免疫方法——次數及間隔時間
*次數一般為2~3次(初次免疫和加強免疫)
-注射后,10~15天再加強注射;
-劑量同或為的一半,用不全佐劑或不用佐劑。
*間隔時間,一般而言,動物越大,間隔越長
-豚鼠、大鼠為7~8天,兔子為10~15天,羊為14~28天;
-第三次注射的間隔時間更長些,效果更好。
舉例1:家兔的免疫
*初次免疫 信號通路Wnt3a抗體相關信息,Anti-Wnt3a
g Ag加入FCA,在背部皮下注射6~8點,每點0.1~0.2ml,也可肌肉內或皮內注射;m-用50~200
*兩周后,加強免疫
g Ag于PBS或FIA中,在肌肉、皮下、靜脈或腹腔內注射;m-將50~200
*抗體效價的檢測:加強免疫一周后,耳緣靜脈采血
-抗體效價測定可用環狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴散法等方法。前者抗體效價在1:4000以上,后者在1:16以上,即可采血,取血清進一步提純。
舉例2:微量抗原淋巴結內注射免疫家兔
*一般選擇2.5~3.0kg的新西蘭種公兔
-先在其兩腳墊注射*福氏佐劑0.2ml(卡介苗每兔合5mg);
-10天后,見胭窩淋巴結腫大,然后將抗原注射至腫大的淋巴結內,*次注射抗原用*福氏佐劑混合乳化;
g;m-以后每隔20天用不*福氏佐劑乳化抗原,以同樣方法加強2次,各次注射的抗原均為25~50
-末次注射兩周后兔耳放血測價 (可達1:128)。
舉例3:豚鼠和大鼠的免疫
*初次免疫
g Ag加入FCA,在背部皮內注射4~6點,每點 0.lml,也可肌肉內或皮下注射;m-用10~100
*加強免疫
g Ag于 PBS或FIA中。在肌肉、皮下或靜脈注射;m-每隔 7~8天,將10~50
*抗體效價的檢測
(4) 免疫劑量
*抗原性強的抗原量應小,過大反會引起免疫抑制;
*免疫周期長的動物可少量多次注射,短的可大量少次。
(4) 免疫劑量 (續)
*各種動物免疫抗原劑量和加強免疫的劑量
(5) 抗體效價的檢測
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