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佐劑 (adjuvant)
*一般可溶性抗原注射后,迅速從注射部位擴散、吸收代謝。佐劑可延長潴留時間,且延長免疫刺激作用。因此在制備抗體的過程中,常將抗原和佐劑一起注射。
*zui常用的佐劑是弗氏佐劑,又分為:
-弗氏不*佐劑(Freund's incomplete adjuvant)
-弗氏*佐劑(Freund's complete adjuvant)
弗氏不*佐劑
(Freund's incomplete adjuvant, FIA)
*是由油劑(石蠟油或植物油)與乳化劑(羊毛脂或Tween80)混合而成,比例為1:1、2:1、3:1或5:1,可根據需要而定,通常2:1。
*使用時與水溶性抗原按1:1比例充分混合,使抗原分散在佐劑中形成油包水乳劑。
弗氏*佐劑 (Freund's complete adjuvant, FCA)
*在弗氏不*佐劑中加入活卡介苗或死的結核分枝桿菌(終濃度為2~20mg/ml),即成為FCA。
*免疫動物時,將弗氏佐劑與抗原按體積 1:1 混合乳化后(油包水)注入動物。
-一般注射時用*佐劑乳化,第二次或第三次注射時用不*佐劑或不用佐劑。
佐劑與抗原乳化的方法
*研磨法:適于制備大量的佐劑抗原
-先將不*佐劑加熱,取1.73ml放人無菌玻璃研缽內;緩緩滴入0.23ml活卡介苗,邊滴邊按同一方向研磨,使菌體*分散。
-按同樣方法滴人抗原,每加一滴應研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢,待抗原全部加人后,應成為乳白色粘稠的油包水乳劑。
*缺點:研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大,對微量或難得抗原不宜采用。
佐劑與抗原乳化的方法(續)
*注射器混合法 白血病相關新基因抗體相關信息
-將等量的*佐劑和抗原分別吸人兩個5ml注射器內,然后插入三通管內,交替推動針管混勻,往復操作直至形成粘稠的乳劑為止。
*優點:無菌操作,節省抗原或佐劑。
*缺點:不易乳化,時間長。
佐劑與抗原乳化的方法(續)
*快速乳化法:利用超聲波粉碎器可快速乳化抗原和佐劑混合物。
-將抗原和佐劑按所需量加入一離心管中,置于超聲波粉碎器上,粉碎頭浸入液面下 0.5cm,離瓶底0.5cm左右,以免打碎離心管。
-每次乳化 10~15s,然后置冰箱lmin左右。反復乳化3~4次即可*乳化。管內殘余量800r/min離心5~10min收集。
*優點:簡單、快速、節省材料。
乳化劑的鑒定
*判斷乳化是否充分,可將一滴乳化好的液體滴在水面上(冷水中),如能長時間保持圓珠形而不散開,表示乳化達到要求。
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