ABC法雖然是一種很好的方法，但是在實際應用過程中．確實也存在許多問題，如親和  素中含有約?％的糖類，它可與組織中含糖基的物質起反應，造成背景著色。親和素的等電  點約為10左右。可帶較多的負電荷，纖維組織可帶較多的正電荷，這兩種電荷可互相吸引，造成背景著色。親和素中有4個結合點，其中一半與連接抗體結合，另一半與復合物結合，如此可降低其敏感性。

    為解決和克服存在的問題，20世紀90年代初提出了用鏈霉親和素(streptavidin)替代ABC法中的親和素―*復合物，形成鏈霉菌抗*蛋白 ―過氧化物酶法(streptavidin-peroxidasemethod。SP法)。鏈霉親和素是從鏈霉菌中分離出的一種蛋白，含有四個亞基，每個亞基均具有與*親和力*的結合點。

    鏈霉親和素的四個亞基可以全部和二抗上的*結合，故又稱鏈霉菌抗*蛋白，它對組織穿透性強，反應速度快。鏈霉親和素的等電點為5.5～6.7，接近中性，所帶的負電荷少，不容易與組織中的正電荷發生相互吸引，因而可降低背景著色。此外，鏈霉親和素不含糖基，不存在與組織中含糖基類物質起反應的現象。該放大系統不含*，可以免除由內源性*所造成的背景著色，因此背景清晰，無非特異性染色，陽性反應物突出，明顯易辨。從某種意義上講，SP法比ABC法的敏感性至少高一倍以上。由于它的敏感性強，效果好，因此更受研究者歡迎。

免疫組織化學SP法原理示意圖