傾注融化的培養基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3 mm（直徑90mm 的平皿，通常要加入18ml～20mL 瓊脂培養基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需貯存，或者培養時間超過48h 或培養溫度高于40℃，則需要傾注更多的培養基。凝固后的培養基應立即使用，或存放于暗處和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培養基成份的改變。在平板底部或側邊做好標記，標記的內容包括名稱、制備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養基編碼系統進行標記。 將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長貯存期限。為了避免冷凝水的產生，平板應冷卻后再裝入袋中。貯存前不要對培養基表面進行干燥處理。對于采用表面接種形式培養的固體培養基，應先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣于烘箱/培養箱中（溫度設為25℃～50℃）；或放在有對流的無菌凈化臺中，直到培養基表面的水滴消失為止。注意

不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。