利用抗原柱純化抗體的常見問題

時間：2012-9-21閱讀：3598

免疫親和純化技術(shù)常用于從多克隆抗體樣本中純化抗原特異性抗體。在這個過程中，純抗原共價結(jié)合于固相支持物上，多克隆混合抗體中的那些對該抗原特異的抗體能和它結(jié)合。經(jīng)過沖洗，將未結(jié)合的抗體除去，然后再將特異性抗體洗脫。這種方法不適用于單抗，因為它們與抗原結(jié)合的活性相同。

免疫親和純化技術(shù)常用于下面兩種情況。*種情況是抗肽抗體的制備。在制備抗肽抗體的過程中，要將抗肽抗體所針對的合成肽結(jié)合到載體蛋白上，以產(chǎn)生有效的免疫原性。針對肽—載體復(fù)合物的多克隆抗體產(chǎn)生后，通常并不能直接使用，而要從血清的大量混合抗體中分離出特異識別該肽段的抗體。免疫親和純化技術(shù)能達(dá)到兩個目的，一是將所需的抗體從針對載體蛋白的抗體中分離出來；二是濃縮特異性的抗肽抗體，提高其相對濃度。

免疫親和純化抗體技術(shù)應(yīng)用的第二種情況是用于多克隆抗體制備，目的是去除不需要的抗體。特異及非特異的背景問題通常在用多抗時更為嚴(yán)重。去除非特異抗體的方法之一是用抗原柱純化所需抗體。這一方法能大大減少干擾免疫化學(xué)檢測結(jié)果的非特異性抗體。雖然有點麻煩，但能將低劣的抗血清變?yōu)橛袃r值的試劑。

這一方法的主要優(yōu)勢是能將特異性抗體從多種抗體的混合樣本中分離出來。它的zui大的缺點是需要大量的抗原，而且特異性抗體所需的洗脫條件可能導(dǎo)致抗體活性的部分喪失。

如果可用的抗原量很少，用免疫親和純化技術(shù)純化所需抗體就不合適。這種情況可以考慮用免疫印跡轉(zhuǎn)移到硝化纖維膜上的抗原來純化抗體，雖然這一方法純化的抗體量有限，但作為分析研究用已足夠。

如果抗體不能穩(wěn)定地從柱上洗脫，或洗脫下來的抗體不再結(jié)合抗原，應(yīng)試用其他的洗脫條件。第九章詳細(xì)討論了免疫親和純化技術(shù)，這種方法可用于分離抗原。這兩種親和純化技術(shù)的原理是一樣的，第九章介紹的洗脫條件在這里也可以試用。

有時少量的抗原能從抗原柱上洗脫。如果在某些檢測中，那些用親和純化獲取的抗體對抗原的污染敏感（如涉及酶活性的檢測），就必須檢測每一份抗體洗脫液中是否有抗原存在。

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