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免疫組織化學的概念:
免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學。
免疫組化實驗所用的抗體有哪些?
免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物。
一、免疫細胞化學技術的概述
*免疫細胞化學(immunocytochemistry, ICC)
-是利用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定細胞內抗原的成分(主要是多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為~。
(一) 對抗原和抗體的要求
*具有特異性高和親和力強的抗體是實驗成功的首要條件。
-對抗體的要求:純度高、比活性強;
*高度特異性抗體的獲得,取決于抗原的純度。
-對抗原的要求:純度高,免疫原性強,穩定無變化。
(二) 抗原 (antigen, Ag)
*抗原的概念:凡是在機體內引起體液免疫和(或)細胞免疫反應的物質,稱為抗原。抗原具有兩個方面的特性:
-免疫原性:引起機體產生抗體和(或)致敏淋細胞的特性;
-免疫反應性:抗原能與相應的抗體及致敏淋巴細胞發生特異的結合或反應的特性。
*根據抗原是否顯示免疫原性分為:
-*抗原:分子量較大,一般在10kDa以上,并具有較復雜的化學組成。
*免疫原性zui強的是蛋白質抗原,多糖次之;脂類和核酸必需和蛋白質及多糖形成復合物才具有良好的免疫原性。
-半抗原:又稱為不*抗原,分子量較小。例如:某些短肽、多糖、類脂和藥物等。
*半抗原必需與載體結合,才能獲得免疫原性。
載 體
*通常是具有高度免疫原性的大分子物質,具有將免疫原性傳遞給耦聯的半抗原能力。
-常用的載體有鑰孔血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)等。
-用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯劑通過功能基團-NH2、-COOH等將半抗原結合到載體上。結合比例為5kDa結合5~25個分子的小肽。
免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些?
實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。
其中石蠟切片是制作組織標本zui常用、zui基本的方法,對于組織形態保存好,且能作連續切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中的組織標本制作方法。
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