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百螢—胱天蛋白酶Caspase 3/7系列產品實驗方案

時間:2023/8/14閱讀:50
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胱an酸蛋白酶在細胞凋亡或程序性細胞死亡中是必需的,在發育和成年生活的大多數其他階段,并且因其在細胞中的作用而被稱為“k子手"蛋白質。免疫系統中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴細胞的成熟。細胞凋亡失敗是腫瘤發展和自身免疫疾病的主要原因之一。

百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供優質的胱天蛋白酶Caspase 3/7系列產品

試驗方案

操作方法

以下說明書僅提供指南,實際應根據您的具體需求進行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定

1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。

1.2制備2X半胱天冬酶底物(50μM)測定溶液,如下所示:

50 uL基質原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris緩沖液(20mM),pH = 7.4

1.3將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液(來自步驟1.2)混合,并在室溫下孵育溶液至少1小時。

1.4使用熒光酶標儀檢測熒光,或使用吸光度酶標儀檢測吸光度。

2.細胞Caspase檢測使用細胞滲透FMK半胱天冬酶探針

2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。

2.2根據需要對細胞進行處理。

2.3通過用20mM Hepes緩沖液(HHBS)稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液(來自步驟2.1),制備2X可滲透的半胱天冬酶底物(20μM)測定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液(來自步驟2.3)混合等體積的處理細胞,并將細胞在37℃,5%CO 2培養箱中孵育至少1小時。

2.5用HHBS洗滌細胞至少一次。

2.6用流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

3.細胞Caspase檢測使用細胞滲透性FMK Caspase探針(僅適用于#13470-13476)

3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。

3.2根據需要對細胞進行處理。

3.3將250 X DMSO儲備溶液(來自步驟3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL細胞)添加到細胞溶液中,并將細胞在37°C,5%CO 2培養箱中孵育1 小時。

3.4用HHBS洗滌細胞至少一次。

3.5用流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

 


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