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人血管緊張素I標準品 SRM 998的產品分析

時間:2024/10/11閱讀:27
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人血管緊張素I標準品 SRM 998的產品分析

SRM Number貨號:SRM 998

品牌:美國NIST

英文名稱: Angiotensin I (Human)

中文名稱:臨床檢驗用標準物質人血管緊張素I

產品規格: 0.5 mg


該材料購自貝克曼儀器公司生物制品業務部(加利福尼亞州帕洛阿爾托)。

使用在 5000 kPa 壓力下運行的 25 cm x 0.4 cm 十八烷基硅烷柱對溶解的 25 μg 該 SRM 樣品進行液相色譜分析。 將樣品溶解在 pH 值為 3.5 的 0.1 mol/L 磷酸三乙胺緩沖液中(體積為 81 份)和 19 體積份乙腈的溶液中。 使用兩種洗脫液:一種是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液;另一種是 75 份緩沖液體積與 25 份乙腈的溶液。 通過測量 215 nm 和 280 nm 處的吸光度來監測洗脫。 在洗脫液比例為 81:19 時,在 215 nm 處檢測到保留時間分別為 16.6 min 和 12.2 min 的主峰和次峰,在 280 nm 處僅檢測到主峰。 

收集與每個峰對應的物質,在 6 mol/L HCl 中水解并分析氨基酸組成。 主峰的氨基酸含量表明它是血管緊張素 I。 小峰(215 nm 處吸光度的 < 1 %)不含可檢測的肽材料。 在這些HPLC條件下,乙酸鹽在溶劑前沿洗脫,無法定量。 在洗脫液比為 75:25 時,在任一波長處均未檢測到額外的峰,表明不存在非肽、UV 吸收材料。


        在脈沖傅里葉變換模式下,使用400 MHz NMR光譜儀測定了六個SRM樣品的乙酸鹽含量。通過將整個樣品(約0.5mg)溶解在0.5mL氧化氘(100原子%D)中來制備用于該分析的溶液。向每種溶液中加入少量4,4-二甲基-4-硅戊酸鈉2,2,3,3-d4作為內部參考。由于發現1.922處的乙酸甲酯質子信號與血管緊張素I的質子信號重疊,因此最初制備了不含乙酸鹽的血管緊張素Ⅰ樣品,以 確定乙酸鹽峰下信號的準確質子計數。通過用0.02mol/L HCl對材料進行兩次凍干,從該樣品中去除乙酸鹽。通過質子核磁共振對該樣品的分析表明,它不含醋酸鹽,感興趣光譜區域的質子計數為3。此后,在不凍干的情況下分析SRM樣品,并從乙酸甲酯峰及其基礎信號的總積分中減去三個質子的適當積分值,以獲得乙酸峰的積分。三個質子積分的適當值是通過平均高場區域中總共29個質子信號的積分來確定的,其中包括許多源自血管緊張素I的甲基、亞甲基和次甲基質子的質子信號。質子信號的數字積分繪制在圖表紙上,并手動測量。

使用了以下儀器參數:數據集大小,16384個點;4µs(30°翻轉角);頻譜寬度,4kHz;掃描次數,2000次;

松弛延遲1.95秒。


更多關于人血管緊張素I標準品 SRM 998的產品分析 的信息,可聯系我司獲取,我司所供美國NIST標準品均原廠訂貨,貨期短,質量保證,售后完善。



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