美國BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測試盒
產品包裝：100T
產品產地：BioAssay Systems

產品說明

一氧化氮（NO）是一種活性基團，在許多關鍵的生理功能中發揮著重要作用。NO 是一氧化氮合成酶氧化精氨酸的產物，參與機體防御反應和生長發育、蛋白調節及功能性生物分子間的相互作用。  

簡單、直接、自動化的NO濃度檢測手段在科研及藥物研發中受到了廣泛應用。NO可被氧化生成亞硝酸鹽和硝酸鹽，因此通常測量NO2-/NO3- 的總濃度作為NO的指標。本公司生產的一氧化氮測試盒采用改良的格里斯法，可準確測定硝酸鹽還原成亞硝酸鹽后的NO產物。該檢測步驟操作簡單，樣品預處理和檢測僅需30分鐘。  

美國BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測試盒產品特點

敏感、準確：采用96孔板檢測，檢測范圍 0.6 - 200 mM。 

快速、可靠：采用優化后的三氯化釩試劑，在60°C將NO3 - 還原成NO2- 只需10分鐘。 

簡單、高通量：檢測過程中只需將樣品與三種試劑混合，在60°C反應10分鐘并讀取吸光度。該檢測方法易于自動化，每天可處理數千份樣品。

適用范圍

直接檢測：血漿、血清、尿液、組織/細胞及食品中的NO濃度。

藥物研發/藥理學：藥物對NO代謝的影響。

試劑盒組成（96孔板供100份檢測）

儲藏條件：試劑盒在室溫下運輸。試劑A、試劑B、試劑C和亞硝酸鹽標準液在4°C下保存，其它試劑可在室溫下保存。保質期6個月。

預防措施：本產品僅供研究用。使用過程中嚴格遵循實驗安全措施。

美國BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測試盒檢測步驟

樣品處理：組織或細胞樣品用1 x PBS 溶液（pH 7.4）均漿。在4℃下以10,000g或更高的轉速離心。取上清液用于NO 檢測。 

血清、血漿、全血、含FBS的細胞培養液、組織或細胞提取物, 需進行脫蛋白處理。尿液和唾液無需脫蛋白處理。

脫蛋白處理: 在1.5mL離心管中加入150 mL樣品和8 mL ZnSO4混勻，然后加8 mL NaOH，再次混勻。在14,000轉/分的轉速下離心10分鐘。轉移100mL上清液到干凈的管中。注意：脫蛋白處理時，若平行將150 mL標準液同樣用ZnSO4 和 NaOH處理，則不需要再計算稀釋因子。

96孔板測定步驟 

1. 標準品：將50 mL 1.0mM標準液與450 mL蒸餾水混合，配制

500 mL 100 mM預混液。使用1.5mL離心管，如下表所示稀釋標準液。

2、反應：將100 mL樣品加入分別標記的離心管中。

（我們建議樣品的檢測需一式兩份）。準備足夠的工作試劑，按每個反應管混合： 55 mL試劑A，55 mL試劑B和110 mL試劑C。在每個樣品和標準管中加入200 mL工作試劑，在60℃下反應10分鐘（也可在37℃下反應60分鐘, 或常溫下反應150分鐘）

3、測量：短暫離心去除沉淀顆粒，轉移250 mL反應產物到96孔板的不同孔中。在540nm (500-570nm) 處讀取吸光值。

比色皿測定步驟

標準品和樣品的準備與96孔板檢測步驟相同, 但用量需增至4倍。反應完成后，轉移1mL至比色皿中，讀取OD540nm 。

美國BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測試盒濃度計算

從標準品的OD值中減去空白對照（Std 4）的OD值。繪制OD與標準濃度的曲線, 通過線性回歸計算斜率（Slope），樣品的NO濃度計算如下：

ODSAMPLE 和 ODBLANK 分別是樣品和水的吸光值。

單位換算：1 mg/dL NO 相當于333 mM、0.001%或10 ppm。

實驗必需品(未提供)

移液裝置，離心管，離心機，加熱板或熱水浴。

96孔板檢測：透明平底96孔板、96孔板吸光率閱讀儀。

比色皿檢測：比色皿、分光光度儀。

備注：抗氧化劑和親核試劑（如：b-巰基乙醇、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇和半胱氨酸）可能會干擾這項檢測，因此樣品制備過程中應避免使用這類化合物。

96孔板檢測的標準曲線。

美國BioAssay Systems一氧化氮（NO)）測試盒

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