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淋巴細胞及其功能檢測常用于對機體免疫狀態進行評估及對疾病療效的監控。
(一)淋巴細胞數量檢測
1.T細胞數量檢測 常用間接免疫熒光法,檢測T細胞表面的CD3、CD4、CD8,來 了解外周血T細胞數量及亞群的變化。外周血T細胞亞群正常值為CD3+T細胞占60%~ 80%,CD4+T細胞占55%~ 60%,CD8+T細胞占20 ~ 30%,CD4+/C D8+T細胞比值一般為2∶1。
2.B細胞數量檢測 常用直接免疫熒光法,檢測B細胞表面Sm Ig 來了解成熟B細胞的數量。正常人外周血Sm Ig +細胞一般為8% ~ 12%。
(二)淋巴細胞功能檢測
1.T細胞功能檢測 常用的檢測方法有淋巴細胞轉化試驗(又稱淋巴細胞增殖試驗)、細胞毒試驗及細胞因子檢測。
(1)淋巴細胞轉化試驗:T細胞在體外受特異性抗原物質或非特異性絲裂原(如 PHA、ConA 等)刺激后,能轉化為體積大、代謝旺盛且能進行分裂的淋巴母細胞。T細胞的這種轉化(或增殖)可分別用形態觀察法、3H-TdR(氚標記胸腺嘧啶核苷)摻入法及MTT法檢測。正常人的T細胞轉化率為70%左右。
(2)細胞毒試驗:Tc細胞、NK細胞對其靶細胞有直接殺傷作用。根據待檢效應細胞的性質,選用相應的靶細胞如腫瘤細胞、移植供體細胞等共同培養,然后測定效應細胞的殺傷活性。常用方法有:51Cr釋放法、凋亡細胞檢測法。
(3)細胞因子檢測法 不同T細胞亞群分泌細胞因子不同,因此,根據細胞因子種類可間接反映T細胞亞群的功能。檢測細胞因子常用的方法有ELISA、生物活性測定法、PCR。(4)皮膚試驗 正常機體對某種抗原建立的細胞免疫與遲發型超敏反應往往同時存在,故測定機體對某種抗原的遲發型超敏反應可間接反映出機體的細胞免疫功能,如結核菌素(OT)試 驗等。
2.B細胞功能檢測 用于檢測B細胞功能的方法有B細胞增殖試驗和抗體形成細胞測定法。
(1)B細胞增殖試驗:B細胞受絲裂原(如 LPS、SPA等)刺激后,可進行分裂增殖成為淋巴母細胞。檢測3H-TdR摻入率可判斷B細胞增殖的能力。
(2)抗體形成細胞測定:常用溶血空斑試驗,即測定對羊紅細胞上的抗原產生抗體形成細胞數目。其基本原理是抗體形成細胞分泌的免疫球蛋白與羊紅細胞上的抗原結合,在補體參與下,出現溶血反應。周圍有溶血空斑出現的細胞即為抗體形成細胞,溶血空斑數即為抗體形成細胞數。
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