磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒_脂肪酸代謝系列_分光法
測(cè)定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
磷脂酶C(EC 3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動(dòng)植物的組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有重要作用。
磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒_脂肪酸代謝系列_分光法
測(cè)定原理:
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對(duì)硝基,在410nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制 :
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體55mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
3.血清:直接測(cè)定。