氧化與抗氧化系列_總巰基測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
生物體內巰基主要包括GSH巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質,而且參與活性氧清除,后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和GSH含量,能夠間接測定蛋白質巰基含量。
氧化與抗氧化系列_總巰基測試盒
測定原理:
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應,生成化合物,在412nm處有大吸收峰。
自備實驗用品:
天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板、乙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體18mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體1mL×1管,4℃避光保存。
樣品的制備:
1.按照組織質量(g):水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水)進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.血清,培養液:稀釋5倍后測定,可取0.1mL樣本,加入0.4mL蒸餾水,混勻,置冰上待測。
操作步驟:
1、酶標儀預熱30min,調節波長至412nm。
2、操作表
在96孔板中加入如下試劑
對照管測定管
樣品(μL)4040
試劑一(μL)150150
試劑二(μL)10
乙醇(μL)10
混勻,25℃靜置10min,測定412nm吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管。