微量法_線粒體異檸檬酸脫氫酶ICDHm測試盒
測定方法：微量法
產品規格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ICDHm（EC 1.1.1.41）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸，同時將NAD+ 還原為NADH，是三羧酸循環的限速酶之一，其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。
微量法_線粒體異檸檬酸脫氫酶ICDHm測試盒
測定原理：
ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH，導致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存;
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的ICDHm（此步可選做）。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體ICDHm活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）在試劑五中加入18mL試劑四充分溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（2）在試劑六中加入1mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑六和180μL試劑五，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
環保在線