三羧酸循環系列_琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒
測定方法：微量法
產品規格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶，位于線粒體內膜上的一種膜結合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細胞產能的呼吸鏈提供電子。
三羧酸循環系列_琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒
測定原理：
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測定2．6-DPIP的還原速度，代表SDH酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的SDH（此步可選做）。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體SDH活性測定。
測定步驟和加樣表：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至600nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）在試劑四中加入18mL蒸餾水充分溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（2）在試劑五中加入1mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑五和180μL試劑四，混勻，立即記錄
600nm處20s時的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
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