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上海紀寧實業(yè)有限公司

聚合酶鏈式反應分析過程

時間:2015-6-14閱讀:1084
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    聚合酶鏈式反應用于在體外將微量的目標DNA大量擴增,以便進行分析。
    反應體系:①樣品DNA;②引物(primer),是人工合成的一對寡核苷酸鏈(約15-20個核苷酸),用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區(qū)之間的區(qū)域;③4種dNTP;④Tag DNA聚合酶,是從一種嗜熱水生(中分離出來的。此酶zui適作用溫度為75~80℃,但短時間在95℃下不失活。⑤適宜的緩沖體系和適量的Mg2+。
  反應過程:①變性:將反應液置于PCR儀中,提高溫度(約90-95℃)使DNA雙鏈解離;②復性:降溫(約60℃左右)退火,使引物與模板結合;③延伸:升溫度至70-75℃,在引物的引導下合成模板單鏈的互補鏈,從而形成DNA雙鏈片段;④重復上述“變性——復性——延伸"的過程。zui初幾次循環(huán)中形成的長鏈DNA較多,但隨著反應的進行,長鏈DNA以算術級數(shù)增加,而夾在兩個引物之間的目標DNA以指數(shù)級數(shù)增長,經(jīng)大約20—30次循環(huán)后,擴增產(chǎn)物中主要是目標DNA。

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