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馬鈴薯病毒S(Potato Virus S)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-04-08 01:39:42瀏覽次數(shù):302次

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馬鈴薯病毒S(Potato Virus S)ELISA試劑盒   

包被用抗體

包被固相載體的抗體應(yīng)具有高親和力和高特異性,可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養(yǎng)液。如免疫用抗原中含有雜質(zhì)(即便是極微量的),在抗血清中將出現(xiàn)雜抗體,必須除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保證試驗的特異性。抗血清不能直接用于包被,應(yīng)先提取IgG,通常采用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經(jīng)硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用于包被,高度純化的IgG性質(zhì)不穩(wěn)定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性,則可采用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高,特異性亦較強,因此不需要作吸收和親和層析處理,一般可將腹水作適當稀釋后直接包被,必要時也可用純化的IgG。應(yīng)用單抗包被時應(yīng)注意,一種單抗僅針對一種抗原決定簇,在某些情況下,用多種單抗混合包被,可取得更好的效果。

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包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗的特點和材料的性質(zhì)而選定。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置過夜,37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。

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