麥角蛋白IgA(Gliadin IgA)ELISA 試劑盒   

麥角蛋白IgA(Gliadin IgA)ELISA 試劑盒操作步驟

    1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃溫育1小時(shí)后，4℃冰箱放置16～18小時(shí)。

    2. 洗滌：倒盡板孔中液體，加滿(mǎn)洗滌液，靜放三分鐘，反復(fù)三次，zui后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。

   3. 加封閉液200微升，37℃放置一小時(shí)。

   4. 洗滌同2。

   5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,，每孔200微升。同時(shí)作稀釋液對(duì)照。37℃放置2小時(shí)。

   6. 洗滌同2。

   7. 加辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí)。

   8. 洗滌同2。

   9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml，室溫暗處10--15分鐘。

   10. 加終止液：每孔50微升。

   11. 觀(guān)察結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄490nm讀數(shù)。

麥角蛋白IgA(Gliadin IgA)ELISA 試劑盒  

包被用抗原

用于包被固相載體的抗原按其來(lái)源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類(lèi)。天然抗原可取自動(dòng)物組織、微生物培養(yǎng)物等，須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細(xì)菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提取）。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點(diǎn)是除工程菌成份外，其他雜質(zhì)少，而且無(wú)傳染性，但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)粒體的重組抗原如不能充分除大腸桿菌成份，用于ELISA，在反應(yīng)中可出現(xiàn)假陽(yáng)性，因不少受檢者受大腸桿菌感染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點(diǎn)是能用基因工程制備某些無(wú)法從天然材料中分離的抗原物質(zhì)。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培養(yǎng)成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微。目前檢測(cè)抗HCV ELISA中所用包被抗原大多為根據(jù)HCV的基因克隆表達(dá)而制備的重組抗原。在傳染病診斷中，不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得應(yīng)用。合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個(gè)抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由于分子量太小，往往難于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白質(zhì)（BSA）等偶聯(lián)，借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附，間接地結(jié)合到固相載體表面。應(yīng)用多肽抗原的另一注意點(diǎn)為他僅能檢測(cè)與其相應(yīng)的抗體。一種蛋白質(zhì)抗原往往含有多個(gè)不同的能引起抗體產(chǎn)生的決定簇，因此在受檢血清中的其他抗體就不能與該多肽抗原發(fā)生反應(yīng)。另外，某些微生物發(fā)生變異時(shí)往往發(fā)生抗原結(jié)構(gòu)變化，在這種情況下，用個(gè)別多肽抗原進(jìn)行包被可引起其他抗體的漏檢。

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