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產品名稱:PCR試劑盒
規格:48T/盒
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。?
性能指標:點擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。?乙氧甲酰基亞乙基三苯基膦 577-37-3 0U ATP Sulfurylase -20℃保存
4-甲苯硼 395356 000U E. coli DNA Ligase -20℃保存
2-甲氧苯硼 395388 200U T4 DNA Ligase -20℃保存
4-甲氧苯硼 5720-07-0 000U T5 DNA Ligase -2℃保存
2,3,4,6-四乙酰氧基-alpha-D-吡喃葡萄糖溴化物 572-09-8 000U Taq DNA Ligase -20℃保存
-叔丁氧羰基哌 57260-7-6 2500U 9°N DNA Ligase -20℃保存
3-氯-2-啶甲 57266-69-0 000U T4 RNA Ligase -20℃保存
2-溴蒽醌 572-83-8 000U T4 RNA Ligase -20℃保存
N-BOC-GAMMA-氨基丁 57294-38-9 50U T4 RNA Ligase 2 -20℃保存
9-溴菲 573-7- 2000U T4 RNA Ligase 2(truncated) -20℃保存
戊*鈉 57-33-0 2000U T4 RNA Ligase 2(truncated K227Q) -20℃保存
2-氨基-4-氯-6-甲氧基嘧啶 5734-64-5 200U ATP Dependent DNase -20℃保存
5-氯-2-氟苯 5738-34-7 00mg DNase I Powder 4℃或-20℃保存
2-溴-5-氟苯 5738-39-2 .5mL DNase I Solution 4℃(短期)或-20℃(*)保存
PCR試劑盒肉浸液瓊脂 規格: 0.ml Rat Insulin Receptor β,ISR-β
Hugh-Leifson培養基 規格: 0.ml Rat Insulin-like growth factor ,IGF-
西蒙氏檸檬鹽培養基 規格: 0.2ml Rat Insulin-like growth factor 2,IGF-2
克氏檸檬鹽培養基 規格: 0.ml Rat Insulin-like growth factor binding protein ,IGFBP-
亞鐵瓊脂 規格: 0.5ml Rat Insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP-2
乳糖膽鹽發酵管培養基 規格: 0.2ml Rat Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3
乳糖發酵管培養基 規格: 0.2ml Rat Insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP-4
乳糖復發酵管培養基 規格: 0.2ml Rat Proinsulin,PI
煌綠瓊脂 規格: 0.ml Rat insulin autoantibodies,IAA
煌綠增菌液 規格: 0.ml Rat islet cell antibody,ICA
GN增菌液 規格: 0.ml Rat Amylin
*培養基 規格: 0.ml Rat ghcagons-like pepfide ,GLP-
WS瓊脂 規格: 0.ml Rat alcohol dehydrogenase,ADH
5%純度乳糖發酵管 規格: 0.2ml Rat aldehyde dehydrogenase,ALDH
Honda氏產毒肉湯基礎 規格: 0.ml Rat acetylcholine,ACH
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