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J-(白血病單核細胞)具體操作
取出凍存管: 根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
初學者易犯錯誤:水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。
離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。
一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。
實驗前準備:將水浴鍋預熱至37℃
J-(白血病單核細胞)用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶 等。
迅速解凍:
迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
.約-2min后
凍存管內液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min
制備細胞懸液:吸棄上清液。
向離心管內加入0ml培養液,吹打制成細胞懸液。
活化與細胞復蘇 收到細胞株包裹時, 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養, 或立即冷凍保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。
細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-96℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
細胞計數:細胞濃度以5×05/ml為宜。
培養細胞將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。
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0003 DL-丙氨suan"/DL-α-丙氨suan"/ DL-初油氨基suan"/DL-α-絲析氨suan"/DL-Alanine BR,98.5% 30-7-7 DL-丙氨suan"30-7-7 DL-丙氨suan" DL-Alanine
0004 β-丙氨suan"/3-氨基丙suan"/β-初油氨基suan"/β-絲析氨suan"/β-氨基丙suan"/β-Alanine BR,98% 0克 07-95-9 β-丙氨suan"07-95-9 β-丙氨suan" β-Alanine
0005 BOC-L-丙氨suan"/N-叔丁氧羰基-L-丙氨suan"/BOC-L-Alanine BR,99% 0克 576-38-3 576-38-3BOC-L-丙氨suan" BOC-L-丙氨suan" BOC-L-Alanine
500克
0006 BOC-D-丙氨suan"/N-叔丁氧羰基-D-丙氨suan"/BOC-D-Alanine BR,99% 7764-95-6 7764-95-6BOC-D-丙氨suan" BOC-D-丙氨suan" BOC-D-Alanine
0007 L-丙氨suan"乙酯鹽suan"鹽/L-Alanine ethlester hydrochloride BR,98.5% 5-59-9 5-59-9L-丙氨suan"乙酯鹽suan"鹽 L-丙氨suan"乙酯鹽suan"鹽 L-Alanine ethlester hydrochloride
0009 L-精氨suan"/-氨基-5-胍基戊suan"/L-蛋白氨基suan"/L-胍基戊氨suan"/L--氨基-胍基戊suan"/L-Arginine BR,98% 74-79-3 74-79-3L-精氨suan" L-精氨suan" L-Arginine
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