南京森貝伽免疫細胞化學技術為您分享啦！

將已經消毒的蓋玻片置于6孔培養板中，按104-105/ml的細胞密度將細胞接種于培養板中進行細胞爬片，培養6-12小時，待細胞貼壁后，3-5天后進行免疫細胞組織化學染色鑒定。PBS清洗時將玻片置于小培養皿中。

步驟如下：

1. PBS清洗標本3次各1min。

2. 95%酒精（冰丙酮等其他固定劑）固定15min。

3. 空氣干燥5min。

4. PBS清洗標本3次各1min。

5. 0.5%Triton X-100（DPBS配）孵育1次20min。

6. PBS清洗標本3次各1min。

7. 3%H2O2孵育15min。

8. DPBS清洗標本3次各2min封閉血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液）20min。

9. 一抗孵育（PBS配，濕盒）4℃過或37℃，60min。陰性對照用一抗來源血清，否則用PBS液。

10. PBS清洗標本3次各1min。

11. 二抗孵育（濕盒）37℃，30min。

12. PBS清洗標本3次各1min。

13. C液（*抗*蛋白-過氧化酶，濕盒）37℃，30min。

14. PBS清洗標本3次各5min。

15. DAB顯色（避光，鏡下觀察至棕色）約3~10min。

16. 蒸餾水洗2次1min。

17. 蘇木素復染0.5~1min。

18. 自來水洗10min左右。

19. 95%乙醇脫水1~2s，樹膠封片。

注意：

1、 沖洗時只須輕輕振蕩培養皿（不可用吸管太用力吹，易脫片）；

2、 加一抗、二抗后沖洗時*次須將玻璃片傾斜。

相關產品：

PBS緩沖液

DPBS緩沖液

載玻片

山羊血清

*

中性樹膠