1.細胞爬片；  

2.PBS清洗標本 3次，各1 min。  

3.冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min）；  

4.空氣干燥5min，PBS漂洗3min，3次；  

5.細胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透細胞，室溫15~30min（丙酮固定法不用此步驟）；  

6.PBS漂洗2次，每次5min；  

7. 3% H2O2去離子水室溫孵育10min，PBS洗；  

8.正常山羊血清封閉，37℃孵育10~20min，甩掉封閉液，勿洗；  

9.加適當比例的一抗工作液孵育，4℃過夜或37℃ 1~2h；  

10.PBS漂洗2次，每次5min；  

11.加入酶標二抗工作液，37℃，30-60min；  

12.PBS漂洗2次，每次5min；  

13.加DAB顯色劑顯色（或AEC顯色），鏡下觀察結果，適時終止；  

14.蘇木素輕度復染；  

15.脫水透明。

16. 封片，中性樹膠封片。  光學顯微鏡觀察，拍片。圖象評分。