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麥哲儀器對蛋白質提取的兩個方法研究

閱讀:572發布時間:2012-10-16

   一、植物組織蛋白質提取方法

1、根據樣品重量(1g 樣品加入 3.5ml 提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4 小時)。
3、用離心機離心 8000rpm40min4℃或 11100rpm20min4℃
4、提取上清夜,樣品制備完成。蛋白質提取液:300ml
1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
這種方法針對 SDS-PAGE,垂直板電泳!

  二、植物組織蛋白質提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體積 3 倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上 1 小時)棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮(含 0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上 1 小時),然后真空干燥沉淀,備用。
4、上樣前加入裂解液,室溫放置 30 分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離 心(15℃8000rpm 以上 1 小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在 4℃待用。
5、用 Brandford 法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。
  藥品:提取液:含 10%TCA 和 0.07%的β-巰基乙醇的丙酮
  裂解液:2.7g 尿素 0.2gCHAPS 溶于 3ml 滅菌的去離子水中(終體積為 5ml),使用前再加入1M 的 DTT65ul/ml。這種方法針對雙向電泳,雜質少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!

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