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豬偽狂犬病毒IgE 蛋白抗體檢測試劑盒
點擊次數：1167 發布時間：2013-8-6
豬偽狂犬病毒gE 蛋白抗體檢測試劑盒
（中文說明書僅為參考，以英文說明書為準）
簡介
偽狂犬病毒 （PRV ）又稱Aujeszky’s 病毒，它屬于α-皰疹病毒，可導致豬群廣泛感染，在養豬業具有重要經濟意義。它能引起廣泛的臨床癥狀包括神經系統紊亂、呼吸性疾病、繁 殖障礙和死亡。許多國家已經開始了*偽狂犬病的計劃。PrioCHECK?PRV-gE 2.0 檢測豬 血清中的PRV gE 蛋白抗體，不受PRV gE 缺失疫苗免疫豬的抗體滴度影響。gE 蛋白抗體陽性表明已用含gE 抗原的疫苗免疫和/或感染不同型的PRV 野毒。 PrioCHECKPRV-gE2.0能夠區分用gE基因缺失苗免疫的感染豬和免疫豬群。 PrioCHECKPRV-gE 2.0 可用于豬的血清流行病學研究，用來檢測測免疫豬群和感染豬群。
PrioCHECKPRV-gE 2.0 ELISA 和gE 缺失苗的使用是偽狂犬免疫-*聯合計劃的基礎。除
此之外，本試劑盒還可從未免疫豬群中檢測出感染豬。
檢測原理
本試劑盒的原理是阻斷ELISA，用于檢測偽狂犬病毒gE蛋白抗體。PRV gE蛋白和特異 單抗（mAb）間的反應被待測樣品中存在的特異性抗體阻斷。
用非感染性的PRV抗原包被酶標板。每孔加入等體積未稀釋的豬血清和ELISA緩沖液
（血清zui終稀釋度為1：2）酶標板在37±1℃孵育1 h或5±3℃放置過夜。洗板后加入酶標 單抗，37±1℃再次孵板1h。再次洗滌后加入顯色劑/底物溶液。20min后加入終止液終止顯色反應并測定OD450nm 。
試劑盒還有1份直接使用的弱陽性質控樣品，它的用途是：
- 使客戶能分析PrioCHECK?PRV-gE 2.0 ELISA試劑盒的變化趨勢
- 使客戶能利用軟件和OD650值相應地調整底物顯色時間
試劑盒組成
- 成分1 酶標板5塊
- 成分2 濃縮的酶標結合物 （30X）1瓶2.5ml稀釋后的酶結合物不穩定，需現用現配。
- 成分3 濃縮稀釋緩沖液（2X）1瓶 60ml配制好的溶液可以在22±3℃保存4小時
- 成分4 濃縮洗液（200X）1瓶 60ml，配制好的溶液可以在22±3℃保存1周
- 成分5陰性對照（直接使用）1瓶1.5ml（綠色）
- 成分6陽性對照（直接使用）1瓶1.5ml（紅色）
- 成分7弱陽性對照 （直接使用）1瓶1.5ml（橙色）
- 成分8底物/顯色劑溶液（直接使用）1瓶 60ml
- 成分9終止液（直接使用）1瓶 60ml
- 其它成分：
10個封板膜、分析報告（Certificateof Analysis）、說明書（Package Insert）
試劑盒未提供的其它材料：
常規化設施：
符合本國生物安全要求的實驗室設施
結果分析用設備：
酶標儀，如Multiscan EX 或同類產品，需裝配450nm 濾光片
可選設備：
洗板機，如Tacan EIV Tray Washer 或同類產品。
注意事項
應嚴格遵從本國的動物樣本處理規定。PrioCHECK® PRV-gE 2.0 試劑盒應在有條件的實驗室
應用。
應該把樣品視為有潛在感染的物質，所有與樣品接觸的材料應該認為有潛在的污染性。
化學試劑的安全性說明見“Safety Regulations and R&S Statements”（Appendix II）
注意
? 為了獲得更佳的結果，需遵從下列因素：
? 嚴格遵守檢測程序
? 所有試劑在使用前放置室溫平衡。
? 每次吸液更換移液頭
? 每種試劑分開保存。
? 禁止使用過期試劑或性狀改變明顯的試劑
? 不要混用不同批次試劑盒中的試劑
? 試驗需使用去離子水或相同質量的水
需預先配制的溶液
試劑盒中的所有試劑使用前恢復至室溫（22 ±3℃）。
1．ELISA 緩沖液：用去離子水或蒸餾水將濃縮稀釋緩沖液 （成份3）稀釋2 倍。濃縮稀釋緩沖液提供量可以配制120ml 。配制好的溶液可以在22 ±3℃保存4 小時
2．酶標結合物：用ELISA 緩沖液新鮮配制酶標結合物工作液。1 塊酶標板需要配制12ml（0.4 ml 酶標結合物濃縮液（30x）加入到11.6ml ELISA 緩沖液中）。
注意：酶標結合物液一定要現用現配）
3．洗液：用去離子水或蒸餾水將濃縮洗液稀釋200 倍。濃縮洗液的量足夠配制終體積為12L 的洗液。
注意：可用商業化ELISA 洗板機洗滌。如無洗板機，每孔應至少加入200uL洗液。隨后傾去酶標板中的液體，按上述方法重復的次數。不必浸泡酶標板。zui后一次沖洗后，用力拍干。
待測樣品
血清樣品試驗前可在4℃儲存幾天，也可在-20℃儲存更長的時間。
檢測步驟
所有試劑和樣品必須恢復至室溫（22 ±3℃），使用前輕輕倒置混合。
1．孵育待檢血清
1.1 每孔加入50ul ELISA 緩沖液。
1.2 向A1 和B1 孔中各加入50ul 陽性對照。（成分7）
1.3 向C1 和D1 孔中各加入50ul 陰性對照（成分5）。
1.4 向E1 和F1 孔中各加入50ul 弱陽性對照（成分6），此為可選步驟。
1.5 剩余每孔加入50ul 待測樣品 （單孔或復孔）。
1.6 用封板膜封板
1.7 輕輕振蕩酶標板。
1.8 37±1℃孵育60min±10 min （相對濕度大于90%）或5±3℃放置過夜。
2．孵育酶標結合物
2.1 孵育結束后傾去酶標板中的液體，用洗液洗板6 次。zui后一次洗滌后用力拍干。
2.2 每孔加入100ul 酶標結合物工作液。
2.3 封板并輕輕振蕩酶標板。
2.4 37±1℃孵育60min±20 min （相對濕度大于90%）。
3．孵育顯色劑/底物溶液
3.1 孵育結束后傾去酶標板中的液體，用200 至300ul 洗液洗板6 次。zui后一次洗滌后用力拍干。
3.2 每孔加入100ul 顯色劑/底物溶液。
3.3 在22 ±3℃（孵育20min （15-30 min）。
3.4 加入100ul 終止液。
3.5 混合酶標板孔中的內容物。
注意：從*孔加入顯色劑/底物溶液開始，計時20min 后開始加終止液，加終止液的順序和速度一定要和加底物相同。
4．讀板并計算結果
4.1 終止顯色反應后15min 內測出OD450nm 。
4.2 計算陰性對照的平均值（C1 和D1 孔），此為zui大OD450 zui大值）。
4.3 陽性對照、弱陽性對照和待檢血清的阻斷率按下式計算：
注意：
待檢血清的OD450
PI = 100 － ----------------------------------------------- ×100
OD450 zui大值
5．有效性標準
基于OD450 的有效性確認：
5.1 陰性對照（C1 和D1 孔）的平均值（zui大OD450 值）必須在0.9 以上。
5.2 陽性對照的阻斷率必須≥65%。
5.3 弱陽性對照的阻斷率必須≥45％。
5.4 不符合上述標準的試驗結果應舍棄。
基于OD650 的有效性確認
5.5 陰性對照（C1 和D1 孔）的平均值（zui大OD650 值）必須在0.4 以上。
5.6 弱陽性對照（E1 和F1 孔）OD650 值的必須>0.15。
5.7 弱陽性對照除以陰性對照的平均OD650 值的阻斷率必須<0.6且>0.3。
5.8 不符合上述標準的試驗結果應舍棄
注意：如果zui大OD450 平均值低于1.000，可能是因為顯色劑/底物溶液的溫度太低，此時應預熱顯色劑/底物溶液至22 ±3℃或延長孵育時間（zui多30min）。如果zui大OD450 平均值高于2.000 推薦縮短孵育時間。
如果樣品值大于zui大OD450 平均值，抑制率可以被認為是0%。
6．結果判定
PI＝＜35％ 陰性 待測血清中不存在PRV-gE 特異性抗體
PI＝≥35％ 陽性 待測血清中存在PRV-gE 特異性抗體。