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技術文章
動物氣管和支氣管假復層纖毛柱狀上皮細胞的培養(yǎng)
點擊次數(shù)：743 發(fā)布時間：2012-11-22
動物氣管和支氣管假復層纖毛柱狀上皮細胞的培養(yǎng)
實驗材料：
1. 大鼠或兔的氣管和支氣管
2. 0.1%*或0.125%*和0.01%EDTA混合消化液
3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS（pH 7.4），含*100u/ml和*100μg/ml，pH7.4
4. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪，*
5. 一次性注射器（1ml或5ml）
6. 200目不銹鋼網(wǎng)篩
7. 離心管（15ml、50ml）
實驗方法：
1. 在無菌條件下取氣管或支氣管，用PBS反復沖洗，以除去血液和粘液。
2. 將氣管或支氣管的一端結扎，另一端插套管并固定。用注射器經(jīng)套管注入1%*，至氣管充盈為止。將氣管浸泡于PBS中，在37℃條件下消化20min。
3. 用注射器抽取培養(yǎng)液，將注射器插入套管，反復沖洗，以分離氣管上皮細胞。然后，將氣管或支氣管游離端的結扎線剪斷，回收管腔內的細胞懸液。
4. 用200目不銹鋼網(wǎng)篩過濾，將濾液離心（1000r/min，10min）。棄上清液后，再用培養(yǎng)液洗滌離心1次。
5. 用培養(yǎng)液懸浮沉淀細胞，調整細胞密度至5×106 個/ml，接種于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板，放入37℃、5% CO2 培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。