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技術文章
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養和測定
點擊次數：316 發布時間：2012-8-8
腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養和測定
一、原理
在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。HL一60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導劑，經二甲基亞砜處理后的HL一60細胞按粒系途徑定向成熟分化，同時細胞的增殖力降低，幾乎全部細胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細胞分化的基礎研究和臨床*的療效檢驗等方面。
二、操作
1．收集對數生長期的HL一60細胞，先按實驗十三測定細胞活力，然后調整細胞濃度，制成300～1000活細胞/ml的細胞懸液。
2．取二個培養瓶每個瓶中加9ml調整好濃度的細胞懸液，然后各加入1ml 3％瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混勻。
3．用微量加樣器吸140μl二甲基亞砜（MDSO），加到一個瓶中，充分混勻，為實驗組，另一瓶不加DMSO，為空白對照組。
4．取一個16mm多孔培養板，每孔加1ml（35mm培養皿需加2ml）細胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標記。
5．在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。
以上各步驟均在無菌條件下進行。
6．然后移培養板或平皿于CO2培養箱中37℃進行培養。
7．培養7～10天，肉眼觀察并計數細胞集落。
三、結果
以肉眼可見的細胞團（含500個以上細胞）作為計數集落的標準。對照組HL一60細胞在含0.3％的軟瓊脂培養基中生長良好，每個孔中可見有多個集落形成，而實驗組HL一60細胞因經二甲基亞砜誘導分化，細胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。
四、集落的計數和計算
集落數=n孔中細胞集落數總和/n孔
集落形成率=集落數/接種培養細胞總數×100％