DNA顯示和細胞有絲分裂相的觀察實驗

時間：2016-11-21閱讀：585

核酸是生物zui重要的組成成分,核酸分為兩大類,即脫氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它們在細胞內的分布及化學性質均有所不同。DNA主要分布在核的染色質或有絲分裂過程中出現的染色體內。RNA分布在細胞質和核仁內。但在染色質及染色體中也含有少量的RNA，核仁中也有少量的DNA。在線粒體，葉綠體等細胞器內除含有RNA外，也含有少量的DNA。

一、目的與要求
了解Feulgen反應的基本原理，學習其操作方法和壓片法，初步掌握細胞分裂各期的主要特點。

二、原理
Feulgen反應的原理是根據DNA經弱酸（1mol/L）水解后，打開料嘌呤和脫氧核糖連接的鍵，在脫氧核糖的一端形成有離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結合，形成含醌基（）的化合物，醛基是一個發色團所以具有顏色，因此凡有DNA的部位，就呈現紫紅色。

三、實驗內容
1． DNA的顯示法-Feulgen反應
2．壓片法
3．細胞有絲分裂相的觀察

四、實驗步驟
（一） DNA的顯示法-Feulgen反應
以蠶豆根尖或洋蔥根尖為材料,進行Feulgen反應的具體操作程序如下:

切取根尖
↓ 長度0.3-0.5cm

Camoy固定劑
↓ 固定10-30分鐘

95%酒精
↓ 10分鐘

70%酒精
↓ 10分鐘

蒸餾水 →(對照) 5%三氯醋酸
↓ ↓90oC 15分鐘
1mol/L HCl ← 蒸餾水
↓ 室溫

1mol/L HCl
↓ 60 oC 8分鐘
Schiff試劑
↓ 40 -60分鐘

亞硫酸水(1,2,3)
↓ 換3次,每次5分鐘

自來水
↓ 將染色后的根尖漂洗干凈,懸著染色效果好的材料

蒸餾水
↓

壓片
↓

鏡檢

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