蛋白質中賴氨酸（lysine，Lys）的含量是谷物品質的主要指標之一。由于動物及人類不能合成，須從食物中得以補充，為此培育高含量賴氨酸的谷物，對于提高營養(yǎng)價值有重要意義。本實驗分別用茚三酮溶液顯色法和染料結合法（Dye Binding Lysine，DBL）測玉米種子中賴氨酸含量。
一、茚三酮顯色法原理： 谷物蛋白中賴氨酸殘基有自由的ε-NH2，它與茚三酮（ninhydrin）試劑可發(fā)生顏色反應，生成紫紅色物質，其顏色與賴氨酸殘基的數(shù)目成正相關。選用碳原子數(shù)目與賴氨酸相同的，配成標準溶液，做出標準曲線，可用以測定谷物蛋白內賴氨酸的含量.
二、材料、儀器設備
（一）材料：不同品種的玉米種子，用粉碎機粉碎，過100目篩子，收集過篩后的細粉，放入廣口瓶內，加入沸程60～90℃的石油醚，使其淹過粉面，浸泡8h，不時攪動進行脫脂。然后過濾，并用石油醚淋洗沉淀若干次，棄去濾液。將脫脂玉米粉晾在干凈的濾紙上，置陰涼通風處吹干石油醚。收集干粉，置干燥器內，保存?zhèn)溆谩?nbsp;
（二）儀器設備：1. 722型分光光度計；2. 水浴鍋；3. 試管；4. 圓頭玻璃棒（圓頭大小要與試管大小配套）。
（三）試劑：1. 緩沖溶液，稱取30g甲酸鈉，溶解于約60ml蒸餾水中，加入10ml8％的甲酸，zui后加水到100ml；2.茚三酮試劑，稱取1g茚三酮和1g氯化鎘（CdCl2.H2O），加入25ml上述緩沖溶液和75ml乙二醇，室溫下放置一天，第二天使用。若出現(xiàn)沉淀，則過濾后使用。該溶液一定要頭一天配制，第二天使用，不宜放置過久，也不能現(xiàn)用現(xiàn)配；3.4％和2％溶液各50ml；4.標準溶液，準確稱取25mg，加數(shù)滴，待溶解后定容至50ml，該溶液亮氨濃度為500μg/ml。準確吸取上述母液1，3，5，7，9ml，分別稀釋至25ml，待用。
三、實驗步驟
（一）繪制標準曲線準確吸取已配好的標準濃度系列的溶液各0.5ml，分別放入5支試管中，每種濃度做三個重復。再取一支試管加入0.5ml蒸餾水做空白對照。向每支試管中各加入0.5ml的4％碳酸鈉溶液和2ml茚三酮試劑（頭一天配好的），混勻，在80℃恒溫水浴上保溫30min。取出后，立即放入冷水浴中冷卻3min，然后向每管內加入5ml的95％乙醇，搖勻，在分光光度計上500nm波長處進行比色，以空白做對照，讀取吸光度。以吸光度值為縱座標，濃度為橫座標，繪出標準曲線，并求出曲線的斜率。
（二）樣品的測準確稱取已脫脂的各種玉米種子干粉各25ml，每個品種做三個重復。放入試管中（試管應預先烘干），加入約300mg細石英砂（估計數(shù)字）和1ml2％碳酸鈉溶液，用圓頭玻棒充分攪拌2min，注意切勿將試管擠破，將試管放入80℃恒溫水浴中，提取10min，應常攪動。取出試管，向每管內按順序加入2ml茚三酮試劑，混勻，放入80℃恒溫水浴中，保溫顯色30min，同時以蒸餾水做一空白對照，取出后，立即放入冷水浴中冷卻3min，以下步驟與標準曲線做法相同。加完乙醇后進行過濾，用濾液進行比色，讀取吸光度。若樣品顏色過深，則可取一定量的濾液用95％乙醇稀釋后比色，吸光度的數(shù)值以在標準曲線范圍內為宜。在標準曲線上查出相當?shù)暮俊Ｒ话阕魑锏淖蚜Ｖ校鞍踪|含量約為干重的10％～20％，富含蛋白的種子中則為30％～50％；賴氨酸含量約為3～7g／16g氮。
四、結果計算按下列公式進行計算：
賴氨酸含量（μg Lys/mg）＝G×2×N/W 。式中：G—為標準曲線上查出的的量（μg／0.5ml）；N—為樣品稀釋倍數(shù)；W—為樣品的重量（mg）。
