T淋巴細(xì)胞表面具有植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白（ConA）等非特異性有絲分裂原受體,在體內(nèi)或體外遇到有絲分裂原刺激后,可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞,依其細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度可測定T細(xì)胞的應(yīng)答功能,稱為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn).
[實(shí)驗(yàn)原理]
T淋巴細(xì)胞表面具有植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白（ConA）等非特異性有絲分裂原受體,在體內(nèi)或體外遇到有絲分裂原刺激后,可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞,依其細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度可測定T細(xì)胞的應(yīng)答功能,稱為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn).
淋巴母細(xì)胞的主要特點(diǎn)：
（1）形態(tài)學(xué)改變:細(xì)胞體積明顯增大,為成熟淋巴細(xì)胞3-4倍.核膜清晰,核染色質(zhì)疏松呈網(wǎng)狀.核內(nèi)見明顯核仁1-4個(gè).胞漿豐富,嗜堿性,有偽足樣突出.胞漿內(nèi)有時(shí)可見小空泡.
（2）細(xì)胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)合成增加.
（3）細(xì)胞代謝功能旺盛.
利用淋巴母細(xì)胞的不同特點(diǎn),目前有多種實(shí)驗(yàn)方法可用于淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度的檢測.根據(jù)其形態(tài)學(xué)改變,可通過體內(nèi)法和體外法檢測；根據(jù)細(xì)胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)合成增加的特點(diǎn),可通過 3 H-TdR 摻入法檢測；根據(jù)細(xì)胞代謝功能旺盛的特點(diǎn),可通過MTT法進(jìn)行檢測.
一、淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)形態(tài)學(xué)檢查法（體內(nèi)法）
[實(shí)驗(yàn)原理]
在體內(nèi),當(dāng)外周血T淋巴細(xì)胞遇到PHA 或ConA后可發(fā)生轉(zhuǎn)化形成淋巴母細(xì)胞,通過采集外周血涂片染色,鏡下計(jì)數(shù)100-200個(gè)淋巴細(xì)胞,計(jì)算其轉(zhuǎn)化率.轉(zhuǎn)化率高低可反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平, 因此常作為檢測細(xì)胞免疫功能的指標(biāo)之一.形態(tài)學(xué)方法簡便易行,但結(jié)果受操作和主觀因素影響較大.
[實(shí)驗(yàn)材料]
1. ConA 溶液：根據(jù)ConA的純度配制成zui適濃度,一般為0.3-0.5mg/ml.
2.姬姆薩染液或瑞氏染液.
3.玻片、離心機(jī)、顯微鏡、計(jì)數(shù)器等.
[實(shí)驗(yàn)方法]
1.實(shí)驗(yàn)前3天,每只小鼠腹腔注射ConA0.3-0.5毫克.
2.3天后,通過摘除小鼠眼球采集外周血,加入預(yù)先加有肝素的試管中.
3.涂片:取1小滴抗凝血滴在玻片*,用推片將血液涂開.自然干燥.
4.固定:取甲醇1-2滴滴在涂片上,自然干燥.
5.染色:加姬姆薩或瑞氏染液2滴于涂片上,同時(shí)加2滴水,用吸管水平涂開,使染液均勻覆蓋涂抹面,染色時(shí)間為5-10分鐘.
6.自來水細(xì)水沖洗染液,然后用吸水紙輕輕吸干玻片上的液體.
7.顯微鏡觀察結(jié)果,計(jì)數(shù)淋巴轉(zhuǎn)化細(xì)胞,計(jì)算轉(zhuǎn)化率.
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
轉(zhuǎn)化過程中,常見的細(xì)胞類型有：淋巴母細(xì)胞、過度型淋巴母細(xì)胞、核分裂相細(xì)胞和成熟淋巴細(xì)胞等.計(jì)數(shù)時(shí),過度型淋巴母細(xì)胞和核分裂相細(xì)胞亦作為轉(zhuǎn)化細(xì)胞.
轉(zhuǎn)化率=轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)/（轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)+未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)）×100%

二 淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)3H-TdR摻入法
[實(shí)驗(yàn)原理]
T淋巴細(xì)胞受 ConA或PHA激活后,進(jìn)入細(xì)胞周期有絲分裂.當(dāng)進(jìn)入細(xì)胞周期S期時(shí),細(xì)胞合成DNA量明顯增加,在培養(yǎng)基中加入氚（3H）標(biāo)記的DNA前身物質(zhì)胸腺嘧啶核苷（TdR）,則3H-TdR 被作為合成DNA的原料被攝入細(xì)胞,摻入到新合成的DNA中.根據(jù)同位素?fù)饺爰?xì)胞的量可推測淋巴細(xì)胞對(duì)刺激物的應(yīng)答水平.摻入的同位素3H,經(jīng)液體閃爍測量法測出,將3H每分脈沖數(shù)（cpm）加以計(jì)算,用不同公式表示結(jié)果.
同位素?fù)饺敕苻D(zhuǎn)試驗(yàn),較之形態(tài)學(xué)方法更為客觀、準(zhǔn)確,重復(fù)性也好,但需一定設(shè)備條件.
[實(shí)驗(yàn)材料]
1.1640 培養(yǎng)液
2.ConA ：根據(jù)ConA 的純度配制成zui適濃度,一般為5-10μg/ml .
3.脂溶形閃爍液：
POPOP（1,4 雙（5-苯基惡唑基-2）苯0.4g
PPO[2, 5二苯基惡唑]4g
無水乙醇 200ml
二甲苯 800ml
POPOP 先用少量二甲苯置 37 ℃ 水浴溶解后,再補(bǔ)足其他成分即可.
4.3H-TdR（市售商品）：臨用前用培養(yǎng)液稀釋成10μCi/ml .
5.多頭細(xì)胞收集儀、玻璃纖維濾紙、樣品杯,液體親爍計(jì)數(shù)器等.
[實(shí)驗(yàn)方法]
1.無菌分離淋巴細(xì)胞（同E花環(huán)）,用1640培養(yǎng)液調(diào)制成1X106/毫升,加入96孔培養(yǎng)板,每孔100μl.
2.每孔加 ConA 100μl,每個(gè)樣品加3孔,另3孔不加ConA作對(duì)照.37℃培養(yǎng)約56小時(shí).
3．結(jié)束培養(yǎng)前加入3H-TdR0.5-1.0μCi/孔.
4.繼續(xù)培養(yǎng)6-12小時(shí)后,用多頭細(xì)胞收集儀將細(xì)胞收集于玻璃纖維濾紙上.
5.烤干后,將濾紙放入閃爍杯中,每杯加閃爍液5毫升,液閃儀測定各管cpm .
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
將ConA刺激組和對(duì)照組各自的平均cpm值,代入下列公式計(jì)算ConA刺激指數(shù)（index of stimulation, SI）
SI=ConA 刺激管的cpm均值/對(duì)照管的cpm均值
三 淋轉(zhuǎn)試驗(yàn) MTT 法
[實(shí)驗(yàn)原理]
MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法）是Mosmann1983年報(bào)告的.原理是活細(xì)胞內(nèi)線粒體脫氫酶能將四氮唑化物（MTT）由黃色還原為蘭色的甲肷,后者溶于有機(jī)溶劑（如二甲基亞楓、酸化異丙醇等）,甲肷產(chǎn)量與細(xì)胞活性成正比.可在560nm處用酶標(biāo)儀測定其OD值.
[實(shí)驗(yàn)材料]
1.MTT:PBS配制成5毫克/毫升的儲(chǔ)存液,過濾除菌后凍存.
2.溶劑:DMSO、10%SDS、0.04的鹽酸-異丙醇.
3.酶標(biāo)儀
[實(shí)驗(yàn)方法]
1.無菌分離淋巴細(xì)胞（同E花環(huán)）,用1640培養(yǎng)液調(diào)制成1X106/毫升,加入96孔培養(yǎng)板,每孔100μl.
2.每孔加ConA100μl,每個(gè)樣品加3孔,另3孔不加ConA作對(duì)照. 37℃培養(yǎng)約56小時(shí).
3.結(jié)束培養(yǎng)前加入20μl/孔.繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)左右.
4.2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,棄上清.
5.每孔加 100μl溶劑,輕微震蕩使甲肷產(chǎn)物溶解.
6.在酶標(biāo)儀上波長560nm測定OD值.
[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
SI=ConA刺激管OD均值/對(duì)照管OD均值.
[注意事項(xiàng)]
1.淋巴細(xì)胞要新鮮制備,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.
2.ConA 刺激時(shí)間要根據(jù)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化情況決定,一般為55-66小時(shí).