1．實驗材料
（1）肽庫：美國NewEnglandBiolabs的環狀7肽庫（Ph，D-C7CTm Phage Display Peptide LibraryKit）。
（2）人正常細胞株和人腫瘤細胞株。
（3）裸鼠。
2．實驗器材和常用試劑
同蛋白質分子為篩選靶目標的實驗方法。
3．實驗方法
1）目標噬菌體的初篩
（1）荷瘤裸鼠動物模型的準備：選用4～6周齡雌性健康BALB/c裸鼠數只，于SPF級動物實驗室常規無菌培養，待用。選取生長狀態良好的肝癌細胞，*常規消化后用含有20％新生牛血清的RPMll640*培養基重懸，細胞計數后，調節細胞濃度達到107個細胞/ml。將重懸好的細胞，用1m1的無菌一次性注射器在裸鼠右側腋下，采用皮下注射的方法將200ul（約5×106個）的腫瘤細胞注射到裸鼠體內。約3～4周后腫瘤達到可供使用的大小。
（2）荷瘤裸鼠經乙mi麻醉后，將1011噬菌體肽文庫靜脈注射人荷瘤裸鼠體內（這些噬菌體經過血液循環后，含肝癌細胞特異性肽的噬菌體將會吸附于肝癌細胞上或被癌細胞內吞），5min后用10ml的DMEM、100m1生理鹽水對小鼠進行心臟灌流。取出裸鼠一部分腫瘤組織用PBS洗3次，研磨后，加入20 ml預先制備好的大腸桿菌感受態細胞，37℃、230r/rain振蕩培養4．5h，分別檢測從腫瘤回收的噬菌體及其擴增后的效價。
（3）荷瘤裸鼠繼續用多聚甲醛固定液灌流至肝臟變白，取下荷瘤裸鼠的主要器官和一部分腫瘤組織，浸入3％多聚甲醛固定，以備組織切片用。
（4）從裸鼠的腫瘤組織回收噬菌體含有能特異性吸附于腫瘤組織的多肽，對回收得到的噬菌體庫用上述相同的方法再進行1次體內循環篩選，即得到了初篩的目標噬菌體。
2）噬菌體單克隆的擴增及純化：同以細胞為靶目標的篩選。
3）目標噬菌體克隆的鑒定
（1）噬菌體在體內組織分布的免疫組織化學鑒定：取出浸在3％多聚甲醛中的組織樣品，自然干燥后，切片后貼到玻片上，晾干，丙酮固定5rain，PBST洗3次，每次3min。1％過氧化氫甲醇混合液室溫浸泡30min，PBST洗3次，每次5min。5％脫脂奶粉室溫封阻20rain，加入按1：1 000稀釋的噬菌體M13抗血清，37℃濕盒中溫育1h，PBST洗3次，每次5rain。加入1：300稀釋的HRP標記的羊抗兔IgG，37℃濕盒中溫育1 h，PBST洗3次，每次5rain。DAB進行顯色反應（約12 rain），用流水終止反應；蘇木青復染細胞核約3rain，自來水沖洗；加飽和*分色，用乙醇逐級脫水，二甲苯3rain透明，zui后用中性樹脂封片觀察。
（2）體外培養細胞水平的鑒定：同以細胞為靶目標的篩選。
