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常用固定液:固定劑品種很多,但大多屬于醛類和醇類。其固定原理不同,各有優缺點。
-醛類(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)
-醇類(常用乙醇)
-其它 (丙酮)
(1) 醛類
*甲醛(福爾馬林)應用zui廣
-原理:形成分子間的交聯,影響蛋白構型而使之固定。
-優點:形態結構保存好,且穿透性強,組織收縮少。
-缺點:
*甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色;
*醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙;
*分子間交聯形成的網格結構可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結果。
-注意事項:
C),為此組織塊不宜過厚。°*縮短固定時間,降低固定溫度(4
*改用中性緩沖福爾馬林,以pH值7.2~7.4 0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液配制成10%甲醛固定液,減少固定液pH的變化。
*固定后充分水洗以減少分子間交聯。
*切片在作免疫組化染色前,先經預處理使抗原再現(抗原修復)。
*戊二醛:
-穿透性強,微細結構保存好,但對抗原有一定影響,常與其他固定劑聯合用作免疫電鏡固定液。
*多聚甲醛(常用4%):
-可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光染色。
*主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。
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