DNA切除修復(fù)蛋白1抗體相關(guān)信息

方法
1．Bio-Rad微型凝膠電泳模具的安裝
帶上手套將凝膠電泳系統(tǒng)的前后玻璃板，梳子用去污劑洗滌，zui后再用去離子水沖洗干凈，除去黏附在玻璃板上凝固的膠和其他污垢。晾干玻璃板或用電吹風(fēng)吹干。將玻璃板的橡膠墊條用吸水紙吸干，然后按Bio-Rad Mini-Protean電泳系統(tǒng)的使用說明書安裝好玻璃板，固定于制膠板上。

2．SDS-PAGE凝膠的配制
① 根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測抗原的分子量大小選擇合適的電泳分離膠濃度。確定分離膠所需凝膠溶液體積（這些數(shù)據(jù)一般由廠家提供，例如Bio-Rad Mini-Protean 3 Elecreophoresis Cel 83mm×75mm×0.75mm,兩塊膠需8ml）
按下表給出數(shù)據(jù)在一小燒杯中按所需丙烯酰胺濃度配置一定體積的分離膠溶液。依次混合各成分。

10ml分離膠各成分所需體積（ml）
        濃度
溶液成分        8%        12%        15%
水        4.6        3.3        2.3
30%丙烯酰胺        2.7        4.0        5.0
1.5mol/L Tris（pH8.8）        2.5        2.5        2.5
10%SDS        0.1        0.1        0.1
10%過硫酸銨        0.1        0.1        0.1
TEMED        0.006        0.004        0.004
一旦加入TEMED，馬上開始聚合，故應(yīng)立即快速旋動(dòng)混合物并進(jìn)入下步操作。
② 迅速在兩玻璃板的間隙中灌注丙烯酰胺溶液，不能有氣泡，留出灌注積層膠所需空間（梳子的齒長再加1cm）。然后小心的在分離膠溶液上覆蓋一層1-5mm的水層，這使凝膠表面變的平整。
③ 等待30-60min，使凝膠聚合。當(dāng)凝膠聚合后，在分離膠和水層之間會(huì)出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面，可以微微傾斜模具，檢測凝膠是否聚合。用去離子水洗滌凝膠頂部數(shù)次以除去未聚合的凝膠，盡可能排去凝膠上的液體，再用濾紙吸凈殘留液體，注意不要接觸膠面。
④ 按下法制備積層膠：按下表給出數(shù)據(jù)在一個(gè)干凈的試管或小燒杯中制備一定體積濃度為5%的丙烯酰胺溶液，依次混合各成分。（兩塊5%積層膠Bio-Rad Mini-Protean 83mm×75mm×0.75mm, 兩塊膠需3ml）
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不同體積積層膠各成分所需體積（ml）
       體積
溶液成分        2        3        5
水        1.4        2.1        3.4
30%丙烯酰胺        0.33        0.5        0.83
1mol/L Tris（pH6.8）        0.25        0.38        0.63
10%SDS        0.02        0.01        0.05
10%過硫酸銨        0.02        0.03        0.05
TEMED        0.002        0.003        0.005
一旦加入TEMED，馬上開始聚合，故應(yīng)立即快速旋動(dòng)混合物并進(jìn)入下一步操作。
⑤ 在已聚合的分離膠上直接灌注積層液。立即在積層膠溶液中插入干凈的實(shí)驗(yàn)預(yù)設(shè)計(jì)的梳子，小心避免混入氣泡，將凝膠垂直放置于室溫下。
⑥ 積層膠聚合*后（30min）,小心移出梳子，使用洗瓶立即用去離子水洗滌加樣槽以除去未聚合的丙烯酰胺。把凝膠固定于電泳裝置上，上下槽各加入Tris*電泳緩沖液。