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抗原準備
抗原,是指能夠刺激機體產生(特異性)免疫應答,并能與免疫應答產物抗體和致敏淋巴細胞在體外結合,發生免疫效應(特異性反應)的物質??乖幕咎匦杂袃煞N,一是誘導免疫應答的能力,也就是免疫原性,二是與免疫應答的產物發生反應,也就是抗原性。
很多物質都可以成為抗原,抗原的具體分類可以參見抗原,在進行單克隆抗體制備過程中,很多物質都可以成為抗原,在常規的科研實驗中,科研者經常選用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重組蛋白、偶聯多肽、偶聯小分子等作為抗原產生特異性的單克隆抗體。
動物免疫
單克隆抗體制備的宿主動物一般選用Balb/c小鼠,鼠單抗的應用范圍相當廣泛,也有一些公司聲稱開發出了兔的單克隆抗體制備技術。
免疫原分為可溶性抗原和顆粒性(細胞)抗原,用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合,腹腔注射抗原與佐劑*混勻后形成的穩定乳狀液,在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫
周期 第1天 采血0.2ml(獲得0.1ml免疫前血清)
*次免疫(抗原加弗氏*佐劑)
第14天 第二次免疫(抗原加弗氏不*佐劑)
第21天 采血和ELISA檢測
第35天 第三次免疫(抗原加弗氏不*佐劑)
第42天 采血和ELISA檢測
第56天 第四次免疫(抗原溶于PBS或鹽水)
第61天 細胞融合
免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。
2、細胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內擠壓研磨,制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合,形成雜交瘤細胞。
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