腎上腺髓質(zhì)素受體抗體說(shuō)明書(shū)，Anti-ADMR

禽IgA提取與純化

（一）材料與試劑配制
1．禽膽汁
2．飽和硫酸銨溶液
3．0.01Mol/L pH7.4PBS液
4．0.10Mol/L pH6.4PBS液（0.30Mol/L NaCl）
5．        DEAE52-纖維素

操作方法
1．取冷藏的膽汁3Ⅹml，緩慢滴加Ⅹml飽和硫酸銨液，邊加邊攪拌，使成25％飽和硫酸銨液。4℃放置30min。
2．        3 000r/min離心30min，去沉淀。
3．        取上清，加飽和硫酸銨液，使成35％的飽和度，4℃放置30min。
4．        3 000r/min離心30min，棄上清。
5．        取沉淀，加0.85％NaCl液溶解，加飽和硫酸銨溶液，重復(fù)步驟3和4三次。
6．        將沉淀用0.85％NaCl液溶解，裝入透析袋，以0.01Mol/L pH7.4PBS液透析。
7．        以0.01Mol/L pH7.4PBS液平衡，過(guò)DEAE52纖維柱（20×250mm）。
8．        取透析樣品4ml（﹥20mg/ml蛋白濃度）加入層析柱。以0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脫。
9．        再用0.10Mol/L pH6.4PBS液（NaCl濃度為0.30Mol/L）洗脫，收集洗脫液。
10．濃縮洗脫蛋白液至20mg/ml，分裝，低溫冰箱保存。

IgE的分離與提純腎上腺髓質(zhì)素受體抗體說(shuō)明書(shū)，Anti-ADMR

（一）材料與試劑
1．血清
2．飽和硫酸銨溶液
3．洗脫液0.005Mol/L pH7.4PB液
0.025 Mol/L pH7.4PB液
0.01Mol/L pH7.4PBS液（0.14mol/L NaCl）
    4．DE52
5．SephadexG150

（二）操作方法
1．取血清倍比稀釋后，加等量飽和（NH4）2SO4溶液，鹽析。
2．離心取沉淀，溶于少量生理鹽水中，透析、除鹽。
3．過(guò)DE52柱，以0.005Mol/L pH7.4PB液洗脫，收集洗脫蛋白峰（IgG），棄去。
4．換以0.025Mol/L pH7.4 PB液洗脫，洗下的蛋白峰主要是IgE。
5．透析除鹽。
6．過(guò)G150柱，以0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl）洗脫，收集洗脫液即為純化的IgE。
7．        濃縮、鑒定。