水通道蛋白-4抗體說(shuō)明書(shū)，Anti-AQP4

效價(jià) 　抗血清的效價(jià)，就是指血清中所含抗體的濃度或含量。效價(jià)測(cè)定的方法常用的是放射免疫法，此法對(duì)所有的抗體均適用。某些由大分子（如蛋白類）抗原所產(chǎn)生的抗體，可用雙擴(kuò)散等方法測(cè)定。前者測(cè)定的效價(jià)極為。而后者則粗糙得多。

　　（1）放射免疫法： 以不同稀釋度的抗血清與標(biāo)記抗原混合，孵育24h后，測(cè)定其結(jié)合率。通常以結(jié)合率為50%的血清稀度和為效價(jià)。如某抗血清的結(jié)合率為50%時(shí)的稀釋度為1：15000，則該血清的效價(jià)就是1：15000。抗血清的效價(jià)，除由抗血清本身的性質(zhì)決定外，還受標(biāo)記抗原的質(zhì)量、孵育時(shí)間，所用稀釋液的成分及其pH等因素的影響，在工作中必須引起注意。（測(cè)定方法見(jiàn)第8章　）

　　（2）雙向擴(kuò)散法：利用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上擴(kuò)散，兩者在相交處產(chǎn)生沉淀線，以觀察和判斷抗血清中是否有抗體及其濃度。

水通道蛋白-4抗體說(shuō)明書(shū)，Anti-AQP4

　　球脂板的制備：100ml pH7.1 的磷酸鹽緩沖液加到15g的瓊脂內(nèi)，于水浴中加溫，攪拌，使瓊脂*溶解，趁熱用紗布過(guò)濾，待溶液冷卻到65℃左右時(shí)，加入疊氮鈉（NaN3），使其在溶液中的濃度為0.1%。用移液管把瓊脂放在干凈平皿或玻片上，約3mm厚，待其冷卻，*凝固后，用打孔器打孔（圖2-4）。*孔內(nèi)加適量抗原（容量為50μl），周?chē)骺變?nèi)分別加入50μl 1：2、1：4、1：8、1：16、1：32及不稀釋的抗血清，37℃下孵育24h，觀察有無(wú)沉淀線產(chǎn)生，以判斷血清的稀釋度

特異性測(cè)定 　　抗血清的特異性或稱專一性是指抗血清對(duì)相應(yīng)的抗原及近似的抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。特異性好就是抗血清的識(shí)別能力強(qiáng)。通常，特異性是以交叉反應(yīng)率來(lái)表示的。交叉反應(yīng)率低，表示抗血清的特異性好，反之則特異性差。交叉反應(yīng)率一般是用競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線來(lái)判斷的。以不同濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率（B/T或B/B0），求出各自在IC50時(shí)的濃度，按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。

　　S=y/Z×100%

　　S：交叉反應(yīng)率，y：IC50時(shí)抗原濃度，Z：IC50時(shí)近似抗原物質(zhì)的濃度。

　　如某抗原的IC50濃度為90Pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)IC50濃度幾乎是無(wú)限大，可以說(shuō)這一抗血清與其它抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似零，即無(wú)交叉反應(yīng)，該抗血清的特異性是好的。

親合力 　　在免疫學(xué)中， 親合力是指抗體與結(jié)合抗原體的活度或牢固度。抗體與抗原結(jié)合疏松，結(jié)合后會(huì)迅速解離，稱為親合力低，反之，親合力高。親合力的高低是由抗原分子的大小，抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原的決定基之間的立體結(jié)構(gòu)型的合適程度決定的。親合力常以親合常數(shù)K表示。K的單位是升/摩爾（L/mol）。在RIA中，K是該抗血清能達(dá)到的zui小檢出量（靈敏度）的倒數(shù)，K=1/[H]，[H]是zui小檢出量，通常，K的范圍在108～1012L/mol之間，也有高達(dá)1014L/mol的。

　　計(jì)算親合常數(shù)的方法20余種，計(jì)算出的K都不能真實(shí)反映實(shí)驗(yàn)情況，只能作為參考。