熒光素標記電壓依賴性陰離子通道抗體IgG

SDS-聚丙烯酸胺凝膠電泳（SDS－PAGE）
①根據要求配制好SDS-聚丙烯酸胺凝膠（一般釆用10%的SDS－PAGE）
②將已配制好的凝膠裝入電泳儀中（注意不要漏液）。
③設計加樣順序，作好實驗記錄，按預定順序加樣。一般裂解液我們按10-20ul/道點樣，重組蛋白按1-2ug/道點樣。
④把電泳裝置與電源連接好，將電壓調至100V電泳10-20min，待溴酚藍遷移出積層膠位置再換用200V，30-40min后關閉電源。
⑤從電泳裝置上卸下凝膠玻璃板，用水沖洗干凈，準備轉膜。

蛋白質樣品（抗原）的制備：
①  細胞的處理方法：向收集到的細胞中加入RIPA裂解緩沖液（三中蛋白酶抑制在使用前加入，終濃度為2ug/ml）在冰上裂解30—60min，然后再插入冰盒進行超聲，超聲強度以不產生泡沫為準，超聲每次2-3秒，重復3-4次，再離心12000rpm3-5min，吸取上清備用。（超聲強度不能過大，防止蛋白碳化）
組織的處理方法：按實驗要求將組織從動物體內取出（樣品不宜反復凍融），取少量（1-2g左右）放入玻璃勻槳器中研磨成勻漿，然后轉入EP管中進行超聲，超聲強度以不產生泡沫為準，超聲每次5-7秒，重復5-6次，再離心12000rpm3-5min，吸取上清備用。
②上述兩種方法得來的樣品處理液還要加入1/4體積左右的上樣Buffer，然后放在沸水浴中加熱3-4min使蛋白變性，方可作為樣品點樣。（注意：在加熱組織裂解液時，肝臟和腎臟組織要特別注意其本身濃度，是在制作裂解液時就適當稀釋，否則加熱后會凝結成固態。還有些組織處理后很粘稠，有帶絲狀物，這是未裂解的核酸，可以適當離心后再用。）