羅丹明標(biāo)記VEGF抗體IgG，Anti-VEGF/RBITC

Western bloting在抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用
     Western bloting是用來對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的一種常用方法，通過抗原抗體的免疫反應(yīng)可以定量測(cè)出抗體的相對(duì)分子量，以及抗體的相對(duì)豐度或與已知抗原的關(guān)系等等。目前它應(yīng)用在多個(gè)領(lǐng)域,在臨床上檢測(cè)傳染病和自身免疫病、過敏癥等，在抗體生產(chǎn)領(lǐng)域它與ELISA、ICC、IHC、IFA等免疫技術(shù)相接合已成為單克隆抗體生產(chǎn)的主要篩選手段。
     在單抗的篩選過程中通常釆用幾中免疫技術(shù)并存的方式進(jìn)行篩選，針對(duì)不同的抗體釆用不同的技術(shù)，有利于提搞抗體生產(chǎn)的篩選效率，下面就針對(duì)幾種常用的方法與Western blot進(jìn)行比較：
方法        ELISA        WB        IHC/ICC        免疫熒光（IFA）
操作        簡(jiǎn)單，周期短        復(fù)雜，周期長        較簡(jiǎn)單        較簡(jiǎn)單（要專門的熒光顯微鏡）
靈敏度        高，易產(chǎn)生假陽性        高，特異性高        較WB低        較ICC高
交叉        有.        有，易識(shí)別（根據(jù)抗原分子的大小）        有，難識(shí)別        有
準(zhǔn)確度        定性        定性定分子量        定位        定位
載體        酶標(biāo)板        凝膠、膜        玻片        玻片
結(jié)果        普通顯色        化學(xué)化光/普通顯色        普通顯色        熒光
在抗體檢測(cè)中Western bloting經(jīng)常要注意到目標(biāo)抗體與抗原（細(xì)胞/組織裂解液）的接合能力，特別是交叉現(xiàn)象，所以一定要設(shè)置好對(duì)照實(shí)驗(yàn)。同時(shí)還有測(cè)血、測(cè)母克隆亞克隆過程中一定要注意抗體的稀釋倍數(shù)以及二抗的使用等等。
總而言之，做Wetern bloting實(shí)驗(yàn)熟練撐握原理和操作是前提，關(guān)鍵是統(tǒng)籌整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，合理安排，注意細(xì)節(jié)，這樣才能保證實(shí)驗(yàn)的性和準(zhǔn)確性。