免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈后用75%乙醇沖洗,晾干后放在水平臺上備用。
*將1%agar 融化后,置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠,約1.5mm 厚,凝固后打孔(直徑 3rnm),孔間距10mm。
抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。ml 抗原樣品,周圍孔內每孔加5m*中心孔加5
*凝膠板置濕盒內,室溫擴散24h。
*觀察結果。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉淀試驗,需較多的抗血清,現已很少用;
*對流免疫電泳,比瓊脂免疫雙擴散法敏感,較簡便、實用;
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
放血或定期抽血
常用以下3種方法
*頸動脈放血法:放血量較多,動物不易中途死亡。例如:2.5kg白兔可放血約80ml。家兔、山羊、綿羊等動物采血常用此法。
*心臟采血法:常用于家兔、豚鼠、大白鼠、雞等小動物,但操作不當易引起動物死亡。
*靜脈采血:家兔可用耳緣靜脈采血;山羊、綿羊、馬和驢可用頸靜脈采血,這種放血法可隔日1次,有時可采集多量血液。
放血或定期抽血 (續)
*采血過程中,動作要輕柔,盡量避免溶血
*血液凝固后,及時離心收集血清,否則細胞溶解釋放的雜蛋白(例如蛋白水解酶)將污染抗體并將抗體水解,降低效價;
*加*,分裝,低溫保存,也可加一定的保護劑如BSA、甘油等。
Anti-WDR26/FITC 熒光素標記Gβ類似蛋白WDR26抗體IgG |
Anti-WEE1 protein/FITC 熒光素標記WEE1蛋白抗體IgG |
Anti-Wnt1/FITC 熒光素標記信號通路Wnt1抗體IgG |
Anti-Wnt2B/FITC 熒光素標記信號通路Wnt2B抗體IgG |
Anti-Wnt3a/FITC 熒光素標記信號通路Wnt3a抗體IgG |
Anti-WNT/FITC 熒光素標記信號通路Wnt抗體IgG |
Anti-WNT9A/WNT14/FITC 熒光素標記信號通路Wnt9a抗體IgG |
Anti-WNT10A/FITC 熒光素標記信號通路WNT10A抗體IgG |
Anti-WRCH-1/FITC 熒光素標記WRCH1抗體IgG |
Anti-WWOX /FITC 熒光素標記包含氧化還原酶的WW域抗體IgG |
Anti-WIG-1/FITC 熒光素標記野生型p53誘導基因1抗體IgG |
Anti-WIP1/FITC 熒光素標記原癌基因WIP1抗體IgG |
Anti-WNK3 protein/FITC 熒光素標記*/*激酶家族成員的基因WNK3抗體IgG |
Anti-WNK4/FITC 熒光素標記一種新的*/*激酶家族成員的基因WNK4抗體IgG |
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