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蘇州艾瑞德生物科技有限公司
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本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物*和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭*抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物*的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物*的含量。
【試劑盒技術指標】
規 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.1ppb
檢測時間： 75min
樣本定量檢測下限
組織（蝦、魚）……………………………………0.2ppb
豬肉/肝 雞肉/肝 …………………………………… 2ppb
飼料………………………………………………… 20ppb
尿液…………………………………………………0.6ppb
交叉反應率
*……………………………………………*
雙烯雌酚…………………………………………… 40%
己烷雌酚…………………………………………… 8%
己炔雌二醇………………………………………﹤0.1%
雌三醇……………………………………………﹤0.1%
樣本回收率
飼 料……………………………………………90±10%
組 織……………………………………………85±10%
尿 液……………………………………………70±10%
【試劑盒組成】
1、微量測試孔：每條8孔，一板12條
2、標準液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1 ppb、 0.3 ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1 ppb
3、酶標記物 12ml………………………………紅色帽
4、抗體工作液 7ml………………………………灰色帽
5、底物液 A液 7ml………………………………白色帽
6、底物液 B液 7ml……………………………… 黑色帽
7、終 止 液 7ml……………………………… 黃色帽
8、20X濃縮洗滌液 40ml…………………………白色帽
9、5X濃縮復溶液 50ml…………………………透明帽
【酶標免疫分析程序】
測定前應須知：
1、 使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、 從4℃冷藏環境中取出所需試劑，置室 溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。37℃環境中反應30min。
6、 取出將孔內液體甩干，用洗液250µl /孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、 每孔加入酶標記物100µl，蓋板膜蓋板后置37℃環境中反應30min。重復步驟6。
8、 顯色：每孔加入底物液A液50µl， 再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，37℃環境中避光顯色15min。
9、 測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內讀完數據），測定每孔OD值。
【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含*成負相關。
1、粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標準吸光度值比較即可得出其濃度范圍（ppb）。假設樣本1的吸光度值為0.310， 樣本2的吸光度值為0.820，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.510；0.1ppb為1.320；0.3ppb為1.030；0.9ppb為0.660； 2.7ppb為0.389；8.1ppb為0.198。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb-8.1ppb； 樣本2的濃度范圍是0.3 ppb-0.9 ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中*實際含量。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標準（0標準）的吸光度值，再乘以*，即：
百分吸光度值（%） ＝ B ×*
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以*濃度（ng /ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中*實際含量。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（索取）
3、標準曲線
B/B0 （%）
DES（ppb） [µg/kg]
圖1：*檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現性
%CV
DES（ppb） [µg/kg]
圖2：*檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結果確定了精密度，圖2顯示出*檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數（%CV）對相應*濃度作曲線，可以看到在全部范圍內變異系數如此之低，可以得到很好的再現性。
【注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會伴隨著出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現重復性不好的現象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5 ）時，表示試劑可能變質。
8、 該試劑盒*反應溫度為37℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產日期、有效期、生產批號見外包裝。
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