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色譜柱技術發展促進了高效液相色譜法在藥物分析中更為廣泛的應用。高效液相色譜法(HPLC)已成為藥物分析,特別是多組分分析和雜質控制中重要、廣泛的分析技術之一。由于色譜柱是液相色譜分離的核心,開發新型或高性能的高效液相色譜填料(又稱為填充劑、固定相),提供多種色譜柱類型一直是色譜研究中豐富、有活力、富于創造性的內容。下面,我們來看看實驗室儀器-色譜柱分類及選購方法。
如今,色譜柱技術的不斷改進創新,填料種類的日益豐富,分離模式和分離方法的逐步完善,為分離分析科學描繪了一幅幅絢麗的圖景新頒布的2015 年版《中國藥典》自2015 年12月1 日起正式實施。新版藥典的變化是將原來各部的附錄整合成了第四部,形成通則并對通則制定了更為合理的編碼,液相色譜法列于2015 年版《中國藥典》(四部)中通則0512 中。
在色譜分析中,如何選擇的色譜條件以實現理想的分離,是色譜工作者的重要工作。色譜是一種分離分析的手段,分離是核心,因此可以說擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。因此選擇一個合適的色譜柱非常重要。
色譜柱可分正相模式色譜柱、反相模式色譜柱和親水模式柱:
正相模式色譜柱:采用極性固定相(如乙二醇、氨基與腈基等鍵合相);常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。
反相模式色譜柱:一般用非極性固定相,以硅膠為基質鍵合不同的基團(如C18、C8);適用于分離非極性和極性較弱的化合物。反相色譜(RPC)在現代液相色譜中應用多,據統計它占整個HPLC應用的80%左右。由于超臨界色譜的崛起,一些過去用正相色譜的實驗逐漸被超臨界色譜所代替,所以反相色譜柱的應用將會更加廣泛。隨著色譜柱填料的快速發展,某些無機樣品或易解離樣品的分析也可用反相色譜法。為控制樣品在分析過程的解離,常用緩沖鹽控制流動相的pH 值。硅膠基質鍵合相(C8和C18)色譜柱使用的pH 值通常為2.5~7.5(2~8),太高的pH 值會使硅膠溶解,太低的pH 值會使鍵合的烷基脫落。近年來技術的更新,利用包被、空間位阻、雜化顆粒等新技術,已經可以使硅膠基質的色譜柱使用范圍擴大到pH 為1~12,流動相為較強酸性或堿性時,可選擇寬pH 值的色譜柱。
親水(HILIC)模式:HILIC不同于反相色譜技術,流動相為反相色譜的流動相,它提供了相對于反相的互補選擇性,通??杀A魝鹘y反相色譜方法無法保留的高極性化合物。需要注意的是HILIC模式中硅膠基質無鍵合相的色譜柱,流動相pH 適用范圍。
對色譜柱的基礎要求是:柱效高、選擇性好,分析速度快等。目前市售的用于HPLC的各種色譜柱種類繁多,從色譜柱填料來分,可分為硅膠基質和有機雜化球基質的色譜柱,還有不同長短、不同微粒大小的色譜柱。
色譜柱的選擇可根據待分析樣品的極性、分子量大小、是否可溶于水等因素來考慮。如樣品分子量大于2000的,可溶于水的,可選擇凝膠色譜柱、大孔徑反相色譜柱、大孔徑離子交換色譜柱。分子量小于2000的,溶于有機相的,可選擇正相模式色譜柱。溶于水,可電離的樣品可選擇反相模式色譜柱或離子交換或未經涂漬親水模式的色譜柱等。
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