蛋白質測定儀（俗稱定氮儀）以國際凱氏定氮法為依據，進行設計制造的，此儀器主機采用蒸氣自動控制發生器，在液位穩壓器的配合下，使蒸氣在數十秒時間內平穩輸出供蒸餾器使用。

執行機關控制下的堿液流經蒸餾管進入定量消化管，使固定在酸液里的氨在堿性條件下揮發。

第二執行機關控制下的蒸氣對堿性條件的試樣再進行蒸餾，使氨*揮發，揮發的氨被冷凝器冷凝下來，*地被固定在硼酸之中，然后用標準酸對其滴定到終點，計算出氮的含量，再乘以換算蛋白質的系數得出蛋白質的含量。

定氮儀操作步驟：

消化：

1.準備6個燒瓶，加標簽。在燒瓶1、2和3中加入1.0ml適當濃度的蛋白質溶液。將樣品添加到燒瓶底部，不要粘在瓶口和瓶頸上。然后，依次加入0.3g硫酸鉀-硫酸銅接觸劑，2.0ml濃硫酸和1.0ml 30％的過氧化氫。 4、5和6燒瓶用作空白對照，以確定試劑中的痕量氮含量并校正樣品測定。 向燒瓶4、5和6中加入1.0ml蒸餾水代替樣品溶液，其他所加試劑與燒瓶1、2和3相同。

2.將裝有試劑的燒瓶放在消化架上，然后連接抽氣裝置。首先，用小火煮沸，然后燒瓶的碳化變成黑色并產生大量氣泡。當泡沫消失并停止時，增加火力，使瓶中的液體稍微沸騰直到溶液澄清為止，然后繼續加熱以使消化液沸騰15分鐘。消化過程中，應隨時旋轉燒瓶，以使內壁內的附著物質流入底部，以確保樣品*消化。消化過程中釋放出的氣體中含有高度刺激性的SO2。因此，應從頭到尾打開泵，將氣體排放到自來水中。整個消化過程應在通風櫥中進行。消化后，關閉火焰，將燒瓶冷卻至室溫。

蒸餾吸收：

蒸餾和吸收在微型中進行。凱氏定氮蒸餾設備有很多種，主要由產生蒸汽，氨蒸餾和吸收氨組成。

1.定氮儀儀器的洗滌

在安裝氮氣表之前，應按一般方法清洗和清潔所有零件。將使用的橡膠管和塞子浸入10％NaOH溶液中，煮沸約10分鐘，洗滌并煮沸10分鐘，然后洗滌數次，然后安裝并固定在鐵架平臺上。在使用該儀器之前，必須用水蒸氣清洗所有走線管，以除去可能殘留在管道中的氨。每次測量樣品前，可以將使用中的儀器清洗5分鐘。對于長時間不使用的儀器，請重復蒸汽沖洗不少于3次，并檢查儀器是否正常。仔細檢查連接以確保沒有空氣泄漏。

首先，在蒸汽發生器中加入約2/3體積的蒸餾水，加幾滴硫酸使其保持酸性，以避免水中氨氣蒸發的影響，并加入少量沸石（或毛細管等）防爆沸騰。沿小玻璃杯的壁添加20ml蒸餾水，以使水通過插管流入反應室，但切勿將玻璃杯中的水排干。塞上桿玻璃塞以保持水密封，以防止漏氣。發生蒸汽后，立即關閉廢液排放管上的開關，以使蒸汽只能進入反應室，這會導致反應室中的水迅速沸騰。從反應器出來的蒸汽通過位于反應室上部的氮氣固定球進入冷凝管，以進行冷卻，并在冷凝管的下端放置一個錐形瓶以容納冷凝液。從設定的氮氣球開始加熱的時間，連續煮5分鐘，然后取下煤氣燈。沖洗后，夾緊連接蒸汽發生器和集熱器的橡膠管。由于氣體冷卻壓力的降低，反應室中的廢液將被自動泵入反應室的殼體中，并通過打開廢液排出口夾將廢液排出。清洗2-3次后，將裝有硼酸指示劑混合物的錐形瓶置于冷凝器管下，以將冷凝水管的下端口*浸入溶液中，蒸餾1-2分鐘，并觀察溶液是否在錐形管中。瓶子變色了。如果沒有變色，則清潔蒸餾單元。取下錐形瓶，蒸餾1-2分鐘，用蒸餾水清洗冷凝器的下部端口，關閉煤氣燈，凱氏定氮儀可用于樣品測量。

2.無機氮標準樣品的蒸餾吸收

由于氮測定操作繁瑣，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術，初學者應首先使用無機氮標準樣品進行重復練習，然后再測定未知的有機氮樣品。通常將已知濃度的標準硫酸銨測試3次。

取五個干凈的100ml錐形瓶，依次加入20ml 2％的硼酸溶液，3-4滴甲基紅混合指示劑（紫紅色），并蓋好瓶口以備使用。取一個錐形瓶放在冷凝管的下端，然后將冷凝管的出口浸入溶液中。

注意：在執行此操作之前，必須打開收集器的活塞，以防止錐形瓶中的液體被吸回。準確地將2ml硫酸銨標準溶液吸到玻璃杯中，小心地提起棒形玻璃塞，使硫酸銨溶液緩慢流入蒸餾瓶中，用少量蒸餾水清洗小玻璃杯三遍，然后放入將其倒入蒸餾瓶中。然后，在帶有量筒的小玻璃杯中加入10ml 30％NaOH溶液，使堿液緩慢流入蒸餾瓶中。當堿液尚未*流入時，關閉玻璃棒塞子。向小玻璃杯中加入約5ml蒸餾水，然后慢慢打開玻璃塞，使一半的水流入蒸餾瓶，一半的水留在小玻璃杯中以進行水封。關閉收集器的活塞并加熱蒸汽發生器以進行蒸餾。由于氨的吸收，圓錐形燒瓶中的硼酸和指示劑的混合物從紫紅色變為綠色。從變色的時間開始，再蒸餾3-5分鐘，移動錐形燒瓶，使燒瓶中的液位離開冷凝器管的下部開口約LCM，用少量的水沖洗冷凝器管的下部開口蒸餾水，再繼續蒸餾1分鐘，取出錐形瓶，蓋上蓋子，準備滴定。初餾后，取下氣體燈，將橡膠管夾在蒸汽發生器和收集器之間，反應后除去廢液，用水沖洗小玻璃杯數次，然后除去廢液。重復洗滌后，可以蒸餾下一個樣品。根據上述方法，用標準硫酸銨進行兩次。再用2ml蒸餾水代替標準硫酸銨兩次以進行空白測定。在錐形燒瓶中滴定每次蒸餾的溶液。

3.未知樣品和空白樣品的蒸餾吸收

將三個消化的蛋白質樣品和三個空白對照溶液依次蒸餾并吸收。向消化后的樣品或空白對照溶液中加入5ml熱蒸餾水，通過一個小玻璃杯將其加入反應室，然后用熱蒸餾水將小玻璃杯洗滌3次，每次約3ml，然后將洗滌液倒入反應室。其他操作根據標準硫酸銨的蒸餾進行。由于消化液中硫酸鉀的濃度很高，因此不容易從凱氏定氮瓶中倒出。必須添加5毫升熱蒸餾水以將其稀釋。如果有結晶，則必須稍微溶解。變熱時，添加玻璃杯以使其流入反應室。此外，應注意的是，在清洗后儀器未*冷卻時，應立即添加樣品或空白對照溶液，否則消化液容易通過冷卻管沉淀和結晶，從而造成堵塞。

滴定：

蒸餾后將樣品和空白一起滴定。打開接收瓶蓋，并用酸微滴定管滴定0.0100mol / l標準鹽酸溶液。當溶液為深灰色時，用蒸餾水沖洗錐形瓶的內壁一次。如果搖動后仍變綠，請小心滴下另一滴標準鹽酸溶液。搖動并觀察瓶中溶液的顏色變化。如果深灰色在一兩分鐘內沒有變化，則認為已到達滴定終點。如果是粉紅色，則表明已經超過了滴定終點，可以從滴定消耗的標準鹽酸溶液量中減去0.02ml，并且每組樣品的氮測定終點的顏色必須*一致。空白對照溶液的接收瓶中溶液的顏色不變或略有變化，綠色尚未出現，因此無法滴定。記錄每次滴定中消耗的標準鹽酸溶液的毫升數，以進行計算。