Portelite 熒光 ssDNA 定量試劑盒用于快速檢測(cè)單鏈 DNA。該試劑盒包含所有基本試劑，包括 Helixyte Green ssDNA 試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品。 Helixyte Green ssDNA 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于定量溶液中的寡核苷酸和單鏈 DNA (ssDNA)。只需使用提供的緩沖液稀釋試劑，添加樣品（可接受 1–20 μL 的任何體積），然后使用 CytoCite、Qubit® 或其他手持或臺(tái)式熒光計(jì)（Qubit® 是 ThermoFisher 的商標(biāo)）讀取濃度。該檢測(cè)對(duì)于 50 pg/µL 至 200 ng/µL 的初始樣品濃度是準(zhǔn)確的，提供了 1–200 ng 的測(cè)定范圍。

量子位熒光計(jì)

Ex: 480 nm

Em： 530 nm

規(guī)格: 0.2 mL PCR 小瓶

CytoCite 熒光計(jì)

Ex: 480 nm

Em： 530 nm

規(guī)格: 0.2 mL PCR小瓶

實(shí)驗(yàn)方案

概述

1.準(zhǔn)備 Helixyte Green ssDNA 工作溶液

2.在每個(gè) 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液

3.在每個(gè)管中加入 10 µL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品

4.在室溫下孵育2分鐘

5.使用 CytoCite 熒光計(jì)或 Qubit 熒光計(jì)檢測(cè)熒光強(qiáng)度

溶液制備F

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

使用檢測(cè)緩沖液（組分 B）將 Helixyte Green ssDNA 試劑（組分 A）稀釋 200 倍。例如，要為 5 個(gè)樣品制備足夠的工作溶液，將 5 μL Helixyte Green ssDNA（組分 A）添加到 1 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中。

注意：通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。為獲得佳效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時(shí)內(nèi)使用。

操作步驟

樣品體積的可接受范圍是 1~20 μL，這具體取決于核酸樣品的估計(jì)濃度。

以下實(shí)驗(yàn)方案基于 10 µL 樣品體積生成，DNA 濃度范圍為 20~1000 ng /mL。

1.將 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每個(gè) Cytocite 樣品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。

注意：使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。

2.在每管中加入 10 µL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品，然后渦旋混合 2~3 秒。

3.在室溫下孵育所有管子 2 分鐘。

4.將樣品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用綠色熒光通道檢測(cè)熒光。

標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的制作

1.執(zhí)行 1:2 連續(xù)稀釋：將 10 ng/μL ssDNA Standard #2（組分 D）添加到檢測(cè)緩沖液（組分 B）中，以獲得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 標(biāo)準(zhǔn)稀釋度。

2.在每個(gè)管中加入 190 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液。

3.將 10 µL 標(biāo)準(zhǔn)品加入 0.2 mL PCR 管中，然后渦旋混合 2~3 秒。

4.在室溫下孵育反應(yīng) 2 分鐘。

5.將樣品插入 CytoCite 并使用綠色熒光通道檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

圖示

圖 1. 使用 Qubit 熒光計(jì)（藍(lán)色）或 CytoCite 熒光計(jì)（紅色）比較 ssDNA 劑量反應(yīng)。

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