小麥胚凝集素（WGA）是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合的凝集素。它是目前研究多、應(yīng)用廣泛的一類(lèi)凝集素。WGA與糖綴合物結(jié)合，其衍生物和綴合物被廣泛用于標(biāo)記細(xì)胞膜和纖維化瘢痕組織，用于熒光成像和分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的iFluor 488小麥胚芽凝集素（WGA）。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品分析方案

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

iFluor 488 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲(chǔ)備液 (200X)

將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲(chǔ)備溶液。注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲(chǔ)存，或在 -20 °C 下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

工作溶液配制

iFluor 488-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲(chǔ)備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細(xì)胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。活細(xì)胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL。

操作步驟

1.活細(xì)胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
1.2 添加 100 µL iFluor 488-WGA 工作溶液。
1.3 將細(xì)胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
1.5 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

2.固定細(xì)胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細(xì)胞。
注意：對(duì)于固定細(xì)胞膜染色，建議在沒(méi)有透化步驟的情況下進(jìn)行染色。固定后透化步驟會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。
2.2 添加 100 µL iFluor 488-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細(xì)胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
2.5 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)圖示

圖 1. 使用 iFluor 488-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物以 5 µg/mL的濃度在活細(xì)胞（Hela細(xì)胞）染色 30 分鐘，然后用 Hoechst 33342（Cat# 17535）染色。后使用帶FITC和DAPI濾波片組的熒光顯微鏡成像。

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百螢-iFluor 488小麥胚芽凝集素（WGA）實(shí)驗(yàn)方案

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